Хепатит С вирус (HCV), антигени cor, NS3, NS4, NS5, IgG антитела

Share Tweet Pin it

Поражението на черния дроб от вирус тип С е един от острите проблеми на инфекциозните заболявания и хепатологията. За болестта е характерен дългосрочен инкубационен период, през който няма клинични симптоми. По това време носителят на HCV е най-опасният, тъй като не знае за болестта си и може да зарази здрави хора.

За първи път вирусът се разговаряше в края на 20-ти век, след което започнаха мащабните му изследвания. Днес познаваме неговите шест форми и голям брой подвидове. Тази вариабилност на структурата се дължи на способността на причиняващия агент да мутира.

В основата на развитието на инфекциозния и възпалителен процес в черния дроб е разрушаването на хепатоцитите (неговите клетки). Те се унищожават под прякото влияние на вирус, който има цитотоксичен ефект. Единственият шанс за идентифициране на патогенен агент в предклиничния стадий е лабораторната диагноза, която включва търсене на антитела и генетичния комплект на вируса.

Какви са антителата на хепатит С в кръвта?

Трудно е човек, който е далеч от медицината да разбере резултатите от лабораторните изследвания, без да има идея за антитела. Факт е, че структурата на патогена се състои от комплекс от протеинови компоненти. След проникването в тялото те предизвикват реакция на имунната система, сякаш я дразнят с присъствието си. По този начин започва производството на антитела срещу хепатит С антигени.

Те могат да бъдат от няколко вида. Поради оценката на техния качествен състав, лекарят успява да подозира инфекция от човек, както и да установи етапа на заболяването (включително възстановяване).

Основният метод за откриване на антитела срещу хепатит С е ензимен имуноанализ. Целта му е да се намери специфичен Ig, който се синтезира в отговор на инфилтрацията на инфекцията в тялото. Отбелязваме, че ELISA позволява да се подозира болестта, след което е необходима допълнителна полимеразна верижна реакция.

Антителата дори след пълна победа над вируса остават за живота в човешката кръв и свидетелстват за миналия контакт на имунитета с патогена.

Фази на болестта

Антителата срещу хепатит С могат да сочат към етапа на инфекциозно-възпалителен процес, който помага на специалиста да избере ефективни антивирусни лекарства и да проследява динамиката на промените. Има две фази на заболяването:

  • латентна. Лицето няма клинични симптоми, независимо от факта, че той вече е носител на вируси. В същото време, тестът за антитела (IgG) за хепатит С ще бъде положителен. Нивото на РНК и IgG е малко.
  • остра - характеризираща се с повишаване на титъра на антитела, по-специално IgG и IgM, което показва интензивно размножаване на патогени и тежко разрушаване на хепатоцитите. Тяхното унищожаване се потвърждава от растежа на чернодробните ензими (ALT, AST), което се разкрива от биохимията. В допълнение, РНК на патогенно средство се открива във висока концентрация.

Положителната динамика на фона на лечението се потвърждава от намаляването на вирусния товар. При възстановяване не се открива РНК на патогена, остават само имуноглобулини G, които показват предадената болест.

Индикации за ОВОС

В повечето случаи, имунитетът не може самостоятелно да се справи с патогена, тъй като не успява да формира силен отговор срещу него. Това се дължи на промяна в структурата на вируса, в резултат на което получените антитела са неефективни.

Обикновено ELISA се прилага няколко пъти, тъй като може да доведе до отрицателен резултат (първо за заболяване) или фалшиво положително (при бременни жени, при автоимунни патологии или при терапия против ХИВ).

За да се потвърди или отхвърли реакцията на ELISA, е необходимо да се извърши повторно провеждане в рамките на един месец, а също така да се даде кръв за PCR и биохимия.

Антитела към вируса на хепатит С се изследват:

  1. инжектиране на употребяващи наркотици;
  2. при хора с цироза на черния дроб;
  3. ако бременната жена е носител на вируси. В този случай както майката, така и бебето се подлагат на изпита. Рискът от инфекция варира от 5% до 25% в зависимост от вирусното натоварване и активността на заболяването;
  4. след като са имали незащитен секс. Вероятността за предаване на вируса не надвишава 5%, но при травма на лигавиците, хомосексуалисти, както и на любителите на честите промени в партньорите, рискът е много по-висок;
  5. след татуиране и пиърсинг;
  6. след посещение на козметичен салон с лоша репутация, тъй като инфекцията може да настъпи чрез заразени инструменти;
  7. преди даването на кръв, ако дадено лице желае да стане дарител;
  8. в медицинския персонал;
  9. за служители на училищните училища;
  10. наскоро освободен от MLS;
  11. ако се открие повишение на чернодробните ензими (ALT, AST), за да се изключи увреждането на вирусните органи;
  12. в близък контакт с вирусния носител;
  13. при хора с хепатоспленомегалия (повишен обем на черния дроб и далака);
  14. при ХИВ-позитивни хора;
  15. в лице с жълтеница на кожата, хиперпигментация на дланите, хронична умора и болка в черния дроб;
  16. преди планираната хирургическа интервенция;
  17. при планиране на бременност;
  18. при хора със структурни промени в черния дроб, идентифицирани с ултразвук.

Имуноензимният анализ се използва като скрининг за масовото изследване на хората и търсенето на носители на вируси. Това помага да се предотврати появата на инфекциозна болест. Лечението, започнало в началния стадий на хепатита, е много по-ефективно от терапията срещу цироза.

Видове антитела

За да тълкувате правилно резултатите от лабораторната диагностика, трябва да знаете какви са антителата и какво могат да означават:

  1. анти-HCV IgG е основният вид антигени, представлявани от имуноглобулини G. Те могат да бъдат открити по време на първичен човешки преглед, така че човек да може да подозира заболяването. С положителен отговор, си струва да се обмисли бавен инфекциозен процес или контакт на имунитет с вируси в миналото. Пациентът се нуждае от по-нататъшна диагноза чрез PCR;
  2. анти-HCVcoreIgM. Този тип маркер означава "антитела срещу ядрени структури" на патогенен агент. Те се появяват в близко бъдеще след инфекция и показват остра болест. Увеличаването на титъра се отбелязва с намаляване на силата на имунната защита и активирането на вирусите в хроничния ход на заболяването. При ремисия, маркерът е слабо положителен;
  3. анти-HCV общ - общият индекс на антитела към структурните протеинови съединения на патогена. Често то точно ви позволява да диагностицирате точно етапа на патологията. Лабораторните тестове стават информативни след 1-1,5 месеца от момента на проникване на HCV в тялото. Общите антитела срещу вируса на хепатит С са имуноглобулин М и G. Изследването им се наблюдава средно 8 седмици след инфекцията. Те продължават да съществуват за цял живот и показват заболяване, което е било прехвърлено или хроничен ход;
  4. анти-HCVNS. Индикаторът е антитяло на неструктурните протеини на възбуда. Те включват NS3, NS4 и NS5. Първият тип се открива в началото на заболяването и показва контакт на имунитет с HCV. Това е индикатор за инфекция. Дългосрочното запазване на високото му ниво е индиректен признак на хронична инфекция на вирусно-възпалителния процес в черния дроб. Антитела към останалите два вида протеинови структури се откриват в късния стадий на хепатит. NS4 - индикатор за степента на увреждане на органите и NS5 - показва хроничен ход на заболяването. Намаляването на титрите им може да се счита за началото на опрощаването. Предвид високата цена на лабораторните тестове, рядко се използва на практика.

Има още един маркер - HCV-РНК, който включва търсенето на генетичен набор от патогени в кръвта. В зависимост от вирусното натоварване носителят на инфекцията може да бъде повече или по-малко заразен. За теста се използват системи за изпитване с висока чувствителност, което прави възможно откриването на патогенен агент в предклиничния стадий. В допълнение, PCR може да открие инфекция в етап, в който антителата все още не са налични.

Време на появата на антитела в кръвта

Важно е да се разбере, че антителата се появяват в различно време, което ви позволява по-точно да установите етапа на инфекциозно-възпалителния процес, да оцените риска от усложнения и също да подозирате, че хепатитът е в началото на развитието.

Общите имуноглобулини започват да се регистрират в кръвта през втория месец на инфекцията. През първите 6 седмици нивото на IgM бързо се увеличава. Това показва остър ход на заболяването и висока активност на вируса. След началото на пика на тяхната концентрация се наблюдава намаление, което показва началото на следващата фаза на заболяването.

Ако антитела от клас G се открият за хепатит С, струва си да подозирате края на острия стадий и прехода на патологията в хроничен. Те се откриват след три месеца от момента на инфекцията в тялото.

Понякога общите антитела могат да бъдат изолирани още през втория месец на заболяването.

Що се отнася до анти-NS3, те се откриват в ранен стадий на сероконверсия и анти-NS4 и -NS5 - на по-късен етап.

Обяснение на проучванията

За откриване на имуноглобулини се използва методът ELISA. Той се основава на реакцията на антиген-антитяло, която се проявява под действието на специални ензими.

Обикновено общият резултат не се записва в кръвта. За количествено определяне на антителата се използва положителният фактор "R". Той показва плътността на тестовия маркер в биологичния материал. Референтните му стойности са от нула до 0.8. Диапазон от 0.8-1 показва съмнителен отговор на диагнозата и изисква по-нататъшно изследване на пациента. Позитивен резултат се взема предвид при превишаване на единицата R.

Антигени на хепатит с

Днес знаем минимум 10 структурни и неструктурни протеини, които са кодирани от HCV генома. Структурните протеини включват ядро, обвивка 1 и обвивка 2. Основният протеин е нуклеокапсиден протеин, докато обвивката 1 и обвивката 2 са гликопротеини на външната обвивка на вируса. Един протеин р7 също е кодиран в структурната област, чиято функция не е ясна, но аналогия с други представители на семейство Flaviviridae предполага, че неговата функция е свързана с освобождаването на вирион от заразената клетка.
Този протеин се разцепва от клетъчната пептидаза от обвивката 2, но не във всички случаи, което води до наличието на обвивка 2 под формата на две форми, все повече и по-малко разширени.

неструктурирани геном на HCV кодира 6 протеина - NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B. NS2 протеинът е вирусна метална зависима протеиназа. NS4A протеин действа като ефекторна или кофактор за NSZ-протеолитична активност в NS4A / NS4B, NS4B / NS5A, NS5A / NS5B сайтове рязане вирус полипротеин.

В момента фрагменти структурни и неструктурни протеини, получени чрез генно инженерство (рекомбинантни протеини) или чрез химичен синтез, се използват като антигени в дизайна на ензимно-свързани имуноанализни системи. Първото поколение имуноензимни тестови системи се появи на пазара през 1989 г. и се основава на директна ELISA. Като имуносупресор бяха използвани фрагменти от два протеина NS3 и NS4, означени като 5-1-1 и С100-3.

В същото време, потвърждавайки тестове на базата на имуноблот с рекомбинантни протеини (RIBA). Чувствителността на тези системи от първа генерация е само 64% ​​за ELISA и 55% за имуноблот. Системите за тестване от второ поколение се появиха на пазара през 1991 година. Като антиген, адсорбиран върху твърда фаза в тези тестови системи, използвани капсидни протеини (фрагмент s22-3) и NS3 неструктурен област антигени (фрагменти от C200 и sZZs) и NS4, подобрявайки по този начин изследванията за чувствителност и специфичност. Тъй като хуморален имунен отговор към капсиден антигени (структурни протеини) naginaetsya бързо камък на неструктурни протеини, периодът от инфекция с откриваема сероконверсия се редуцира до два месеца.

Системи за потвърждаване на тестове, базирани на имуноплоскост позволява да се идентифицират антигените, участващи в реакцията. Резултатите, получени с тези системи за тестване, се интерпретират като положителни единствено чрез реакцията на антителата в тестовия субстрат с най-малко два антигена, докато в присъствието на реакция само с един от антигените резултатът се счита за несигурен. Установено е, че специфичността на второто поколение тестови системи зависеше от източника на антигените. През 1993 г. на пазара се появи трето поколение системи за изпитване. В допълнение към гореспоменатите антигени, тези тестови системи също използват антигени, чиято аминокиселинна последователност съответства на имунодоминантните области на NS5 протеини.

В системите за изпитване първа, втора и трета генерация, като антигени Използват се рекомбинантни или синтетични пептиди. Понастоящем също така е възможно да се идентифицират системите за тестване от четвърто поколение, в които се използват комбинации от рекомбинантни и синтетични пептиди като имуносорбентен.

Опит в прилагането системи за изпитване различни поколения в света е много голям. Установено е, че при използване на системи за изпитване на първото или второ поколение при пациенти с остър вирусен хепатит С антитяло се открива при 10-16, и в някои случаи 25-30 седмици от началото, diagnosticums на трето поколение право този период да се намали 2-3 седмици. Според по общите системи за изпитване чувствителността на данните на първо, второ и трето поколение са съответно 70-80%, 92-95% и 97%.

В същото време, според S. Colin, 2001, чувствителност системи за изпитване от третото поколение е 98,9% при пациенти с хронично чернодробно заболяване и 97,2% при специални контролни панели на серуми. Постигането на висока чувствителност на трето и четвърто поколение системи за имунологични тестове включва някои проблеми при гарантирането на спецификата на проучванията, които в някои случаи могат да доведат до фалшиви положителни резултати. В литературата има данни за възможни грешки в специфичността на тестовите системи ELISA 3. Те са общи за всички системи за тестване на ELISA, включително системи за тестване за диагностициране на СПИН.

Фалшивите положителни резултати могат да бъдат следствие от увеличава съдържание в пробите на гама-глобулин (серумен африканска раса от пациенти, множествена миелома, ревматоиден фактор), чернодробни заболявания (цироза, рак), автоимунни заболявания (колаген заболяване, автоимунен хепатит), други вирусни инфекции (HIV, хепатит В), и дългосрочно серуми съхранение промяна на температурните условия. Провеждането на всякакви имунизации може да бъде придружено от увеличаване на честотата на фалшивите положителни резултати. Действащите понастоящем мерки за отстраняване на този проблем са следните: а) повторно поставяне на пробата в една и съща IFTS; б) повторно откриване на анти-HCV в друг IFNT; в) използване на потвърждаващи тестове на базата на ELISA и имуноблот.

Използвайки обаче предложените методи за проверка резултатите често водят до несъответствия в окончателното им тълкуване, както показват изследванията на руски и чуждестранни изследователи.

Понастоящем производителите на IFTS за откриване на анти-HCV постигат висока чувствителност или чрез по-пълно откриване на антитела срещу NS3 или антитела към основните антигени. Сравнителните проучвания, проведени върху различни рискови групи и специални контролни панели, показаха, че тестовите системи, които по-добре откриват антитела към NS3, са малко по-чувствителни от системите за тестване, които по-добре идентифицират антитела към основните антигени. Тяхната чувствителност беше съответно 99,9% и 98,6%.

Общите маркери и транскриптът на анализа за антитела срещу хепатит С

Вирусното увреждане на черния дроб днес често се проявява в практиката на гастроентеролозите. И лидерът, разбира се, ще бъде сред тези хепатити С. Отивайки в хроничния стадий, причинява значителни увреждания на чернодробните клетки, нарушавайки храносмилателната и бариерната му функция.

Хепатитът С се характеризира с бавен поток, дълъг период без проявление на основните симптоми на заболяването и висок риск от усложнения. Болестта за дълго време не се отделя и може да се разкрие само чрез теста за антитела срещу хепатит С и други маркери.

Хепатоцитите (чернодробните клетки) са засегнати от вируса, причинява тяхната дисфункция и унищожаване. Постепенно, след преминаването през етапа на хронификация, болестта води до смъртта на човек. Навременната диагноза на пациент за антитела срещу хепатит С може да спре развитието на заболяването, да подобри качеството и продължителността на живота на пациента.

Вирусът на хепатит С е изолиран за първи път в края на 20-ти век. Днес медицината разграничава шест вариации на вируса и повече от сто от неговите подтипове. Определението за разнообразие на микроб и неговия подтип в дадено лице е много важно, тъй като те определят хода на заболяването и следователно подходите към неговото лечение.

От първоначалното влизане на вируса в човешката кръв, преди появата на първите симптоми, това отнема от 2 до 20 седмици. Повече от четири пети от всички случаи на остра инфекция се развиват без никакви симптоми. И само в един от петте случая е възможно да се развие остър процес с характерна ярка клинична картина съгласно всички правила за предаване на жълтеница. Хроничният ход на инфекцията придобива повече от половината от болните, след това преминава на цироза на черния дроб.

Идентифицирани във времето антитела срещу вируса на хепатит С са в състояние да диагностицират инфекцията на най-първичния етап и дават на пациента шанс за пълно излекуване.

Какви са антителата срещу хепатит C?

Хората, които не са свързани с медицината, могат да имат естествен въпрос - антитела срещу хепатит С, какво е това?

Вирусът на това заболяване в неговата структура съдържа редица протеинови компоненти. При поглъщане тези протеини причиняват имунната система да реагира и да се образува антитела срещу хепатит C. Различни видове антитела са изолирани в зависимост от вида на оригиналния протеин. Те се определят лаборатория в различно време и диагностицират различните етапи на заболяването.

Как се извършва тестването на антитела срещу хепатит С?

За откриване на антитела срещу хепатит С, човек в лабораторията произвежда ограда на венозна кръв. Това проучване е удобно, тъй като не изисква предварителна подготовка, освен че въздържанието от ядене е 8 часа преди процедурата. В стерилна тръба кръвта на субекта се запазва, след имуноензимен анализ (ELISA), базиран на свързване на антиген-антитяло, се откриват подходящи имуноглобулини.

Индикация за диагнозата:

  • нарушения в работата на черния дроб, оплаквания на пациента;
  • повишени показатели на чернодробната функция при биохимичен анализ - трансаминази и билирубинни фракции;
  • предоперативно изследване;
  • планиране на бременността;
  • съмнителни данни за ултразвукова диагноза на коремната кухина, по-специално на черния дроб.

Но често антитела срещу хепатит С се откриват в кръвта случайно, когато се изследва бременна или планирана операция. За човек тази информация в много случаи е шок. Но не се паникьосвайте.

Има редица случаи, при които са възможни както фалшиво-отрицателни, така и фалшиви положителни резултати от диагнозата. Ето защо, след консултация със специалист, се препоръчва да се повтори съмнителен анализ.

Ако се открият антитела срещу хепатит С, не си струва да се приспособяваме към най-лошото. Трябва да потърсите съвет от специализиран специалист и да проведете допълнителни изследвания.

Видове антитела срещу хепатит С

В зависимост от антигена, с който се образуват, антителата за хепатит С се разделят на групи.

Анти-HCV IgG - клас G антитела срещу вируса на хепатит С.

Това е основният тип антитела, определени за диагностициране на инфекцията по време на първоначалния скрининг при пациенти. "Тези маркери за хепатит С, какво е това?" - всеки пациент ще поиска от лекаря.

Ако тези антитела срещу хепатит С са положителни, това показва, че имунната система е била изложена на този вирус преди, може да има бавна форма на заболяването без ясна клинична картина. По време на вземането на проби няма активна репликация на вируса.

Откриването на имуноглобулинови данни в кръвта на човека е причина за допълнително изследване (откриване на РНК на причинителя на хепатит С).

Анти-HCV ядрен IgM - антитела от клас М на ядрени протеини HCV

Този тип маркери започва да се откроява веднага след като патогенният микроорганизъм навлезе в човешкото тяло. Лабораторията може да бъде проследена месец след инфекцията. Ако се открият антитела срещу хепатит С от клас М, се диагностицира острата фаза. Броят на тези антитела се увеличава в момента на отслабване на имунитета и активирането на вируса в хроничния процес на заболяването.

С намаляването на активността на патогена и прехода на болестта към хронична форма, този тип антитела може да престанат да бъдат диагностицирани в кръвта по време на изследването.

Общо анти-HCV - общо антитела срещу хепатит С (IgG и IgM)

В практически ситуации те по-често се отнасят към този тип изследване. Антитела срещу хепатит С вирус общо представляват откриване на двете маркери класове като М и G. Това става информативен анализ след съхранение на първия клас на антитела, т.е. 3-6 седмици факта, пост-инфекция. Два месеца по-късно средно след тази дата активно се произвеждат имуноглобулини от клас G. Те се определят в кръвта на болен човек за цял живот или до отстраняване на вируса.

Общите антитела срещу хепатит С са универсален начин за първично скриниране на заболяването един месец след инфекцията на човек.

Анти-HCV NS - антитела срещу неструктурни протеини HCV

Споменатите по-горе маркери принадлежат към структурните протеинови съединения на причинителя на хепатит С. Но има един клас протеини, наречени неструктурни протеини. Те могат да бъдат използвани и за диагностициране на заболяването на пациента. Това са NS3, NS4, NS5 групи.

Антителата към NS3 елементите се откриват на първия етап. Характеризира първоначалното взаимодействие с патогена и служи като независим индикатор за наличието на инфекция. Дългосрочното задържане на тези титри в големи обеми може да бъде показател за повишения риск от преход на инфекция в хронична форма.

Антитела към NS4 и NS5 елементите се откриват в късните периоди на заболяването. Първият от тях показва нивото на увреждане на черния дроб, а вторият - за стартирането на механизми за хронична инфекция. Намаляването на титрите на двата показателя ще бъде положителен знак за появата на ремисия.

На практика наличието на неструктурирани хепатит С антитела в кръвта рядко се проверява, тъй като това значително увеличава разходите за изследването. По-често за изследване на чернодробното състояние, се използват антитела, които са ядро ​​на хепатит С.

Други маркери на хепатит С

В медицинската практика има няколко други показателя, които оценяват присъствието на пациент с вируса на хепатит С.

HCV-RNA - РНК на вируса на хепатит С.

Причиняващият агент на хепатит С е съдържащата РНК, следователно е възможно да се извърши обратно транскрипционен PCR-метод за откриване на ген на патогена в кръвта или биоматериал, взет с чернодробна биопсия.

Тези системи за тестване са много чувствителни и могат да открият дори една единична частица от вируса в материала.

По този начин е възможно не само да се диагностицира болестта, но и да се определи нейният вид, което помага да се разработи план за бъдещо лечение.

Антитела срещу хепатит С: тълкуване на анализа

Ако пациентът получи резултатите от анализа за откриване на хепатит С с ензимен имуноанализ (ELISA), той може да се чуди - хепатит С антитела, какво е това? И какво показват те?

При изучаване на биоматериал за хепатит С, общите антитела не се откриват.

Да разгледаме примери за IFA анализи за хепатит С и тяхното тълкуване:

"Хепатит С вирус: вирусни антигени и отговора им на имунната система на гостоприемник информация наръчник Novosibirsk UDC 616.36-002.14: вирус 578891] -078.33 хепатит С :. "

ВИРУС ХЕПАТИТ C:

антигени на вируса и реакция

върху тях имунната система

Хепатит С вирус: антигени на вируса и реакцията към тях на имунната система на макроорганизма:

информационно-методично ръководство / Л.И. Николаев.

- Новосибирск: Vector-Best, 2009. 78 стр.

Ръководството очертава съвременното разбиране на молекулярната биология на вируса на хепатит С (HCV) антиген и имунните защитни сили на приемащата когато заразени с този вирус. Разгледали разликите в специфичния хуморален имунитет при хора с остър и хроничен хепатит С, модели на промяна в съдържанието на анти-вирусни антитела с настоящия курс на остри и хронични инфекции, както и специфичните особености на хуморален имунитет при деца с маркери на HCV инфекция.

Ръководството е предназначено за служители на биологични и медицински изследователски институти, за работници от медицински диагностични центрове и студенти от преподавателски факултети на лекари.

LI Николаева - доктор по биологични науки, водещ изследовател на Изследователския институт по вирусология VI Ленин. DI Ивановски Руска академия по медицина.

Публикува се в изданието на автора.

© Николаева ЛИ, 2009 г. © ZAO Vector-Best, 2009

СПИСЪК НА АКРОНИМИТЕ

Ako - аминокиселина (-та) остатък (-tki) ALT - аланин аминотрансфераза АРС - антиген-представящи клетки AST - аспартат аминотрансфераза HCV - вирус на хепатит С TOS - хепатит С ХИВ - вируса на човешкия имунодефицит HPV - вирус частици HWR - хиперпроменлив регион IL - интерлевкин IFN - интерферон Ш - килодалтона LDL - ниска плътност липопротеини VLDL - много ниска плътност липопротеини моноклонално антитяло - моноклонално антитяло МНС - главния хистосъвместим комплекс (главен комплекс за тъканна съвместимост) NTR - нетранслиран регион AHC - OST първи хепатит С RT-PCR - обратна транскрипция полимеразна верижна реакция HPV - psevdovirusnye частици PCR - полимеразна верижна реакция CHC - хроничен хепатит С TCL - Т-хелперните лимфоцити CTLs - цитотоксични Т лимфоцити EPR - ендоплазмения retirulum

СЪДЪРЖАНИЕ

Глава 1. Вирус на хепатит С

1.1. Организация на вирусния геном

1.2. Структурата на вириона

Глава 2. Основните антигени на вируса на хепатита.

2.1. Структура, функции и епитопи на обвити гликопротеини

2.2. Нуклеокапсиден антиген

2.3. Характеристики на протеина NS2

2.4. Структура, функции и епитопи на протеина NS3.

2.5. NS4a и NS4b полипептиди и техните детерминанти. 35

2.6. Биологично значение и епитопи на протеини NS5a и NS5b

Глава 3. Ролята на имунната система при ограничаване на инфекцията с HCV

3.1. Основните фактори на имунната система, които засягат елиминирането на вируса в острата фаза на инфекцията. _

3.2. Ролята на Т-клетъчния отговор при хепатит С

3.3. Хуморален отговор на антигени на вируса на хепатит С 49 3.3.1. Специфични антитела в острата фаза на инфекция. 3.3.2. Специфичен хуморален имунитет в естествения курс на хроничен хепатит С. 55 3.3.3. HCV-специфичен хуморален имунитет при хора, които са претърпели остра инфекция с възстановяване

3.3.4. Специфичен хуморален имунитет при деца с маркери за HCV инфекция

Въведение

Понастоящем в Руската федерация, както и в повечето страни, има неблагоприятна епидемиологична ситуация при парентерален вирусен хепатит [1-3]. Очаква се до 2015-2020 г. броят на заразените хора по света ще се удвои [2, 3]. От 2001 г. насам честотата на остър хепатит С (OCS) намалява в нашата страна [1, 4]. След 2004 г. честотата на откриване на хора с хроничен хепатит С (CHC) започва да намалява [5, 6].

Въпреки това, сред децата до 2006 г. се наблюдава увеличение на броя на пациентите с CHC [1, 5, 6]. Според експерти 1.4-2.4% от гражданите на Руската федерация са заразени с вируса на хепатит С (HCV), а повечето от тях вече имат хронична форма на инфекция [7, 8]. За CHC типична прогресивна разбира води до образуването на чернодробна цироза (30%), първичен хепатоцелуларен карцином (15%) и екстрахепатални прояви (до 74%) [9, 10].

Въпреки интензивно изучаване на HCV инфекция, тя все още е в състояние да определи причината за честите форми на хронична инфекция, за идентифициране специално имунен отговор, което води до естествената елиминирането на вируса на острата фаза на инфекцията, както и да се създаде превантивна ваксина. Известно е, че HCV антигени са в състояние да индуцират В и Т клетъчен отговор, който в 15-25% от хората с остър хепатит С е достатъчен за елиминирането на вируса [2, 11]. Но най-често острата фаза на инфекция преминава в хронична форма на фона на повече или по-малко изразен адаптивен имунен отговор [12, 13].

Вирус на хепатит С - уникален патоген, който може да се изплъзне имунния контрол, създаване на нови генетични и антигенни варианти, забавяне образуването на Т-хелперен отговор и Т-клетки убийци в остър хепатит С инфекция и да причини отново възстановява при хора. Интензивно изучаване на HCV инфекция започва след установяването на причинителя през 1989 г. и най-вече преследва основната цел - създаването на превантивна ваксина [14, 15]. До края на 1990-те години, след неуспешни опити да се разработи ваксина на базата на рекомбинантни HCV протеини на обвивката на фокуса на изследването на антивирусната имунитет беше насочено към конкретна реакция на Т-клетките.

Трябва да се отбележи, че изследването на защитните имунни механизми при хепатит С е ограничено в голяма степен от липсата на достъпен лабораторен модел на инфекция, вирусът засяга само хора и шимпанзета. Но, както показаха А. Басет и съавтори, при шимпанзетата, заразени с вирус, ходът на инфекцията е по-лек, а възстановяването става по-често, отколкото при хората [16].

Това ръководство обобщава текущите данни за HCV антигените и изследва възможностите за имунна защита на човешкото тяло при тази инфекция. Особено внимание се обръща на специфичен хуморален отговор, тъй като е изчезнал от областта на интензивното изучаване. Както отбелязват чуждестранните изследователи, това се дължи главно на липсата на налични методи за анализ на антитела към отделни (индивидуални) антигени на HCV [17]. В нашата страна от 1998 г. са на разположение за имунологично комплекти за анализ на имуноглобулини към определени антигени на HCV, които допускат домашни експерти, за да получите ценна информация за характеристиките на хуморален отговор на вирусни протеини.

6 Глава 1. Вирус на хепатит С

1.1. Организацията на вирусния геном в периода 1989-1990., Благодарение на развитието на молекулярно-генетични техники възможни клонирането и изолацията на генома на HCV, а след това самия вирус, чието съществуване е било предсказано по-рано [14, 15, 18, 19]. Особености на организацията на генома на HCV право да го включи в семейството Flaviviridae в нов род Hepacivirus, чиито членове по-късно от стомана и други вируси [15, 20, 21]. Геномът на HCV е едноверижна РНК с положителна полярност и съдържа около 9400-9600 нуклеотидни остатъка. Тя се характеризира с: уникална отворена рамка за четене, къси 5-и 3-крайни непроменени участъка (НТО) и области с висока честота на мутации [21, 22].

Отворената рамка за четене кодира един протеинов прекурсор, наречен полипротеин, който се състои от 3008-3037 аминокиселинни остатъци (като) [23]. В резултат на съвместното и след-транслационното протеолитично разцепване на полипротеина и преработката на продуктите се формират структурни и неструктурни протеини. Оформлението на вирусните антигени в полипротеина, местата на действие на протеазите и степента на хомология между различните изолати на вируса е показано на Фиг. 1 [24].

Поради генетичното разнообразие на HCV в началото на 90-те години, е трудно да се класифицират изолатите му. През 1994 г. на Международната конференция II за вируса на хепатит С и свързаните с него вируси бе договорено да се основава класификацията на вирусите върху геномната област, кодираща протеина NS5b [25]. В резултат на това бяха изолирани 6 генотипа и около 80 подтипа на HCV.

(5-NTO) * (3-STO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% 1. Схема на локализиране на вирусни антигени в полипротеина [24]. Мястото на действие на клетъчните протеази се отбелязва със стрелки отгоре, за серин протеаза на HCV - отдолу. Мястото, разцепено от NS2 / NS3 вирусната протеаза, се идентифицира със звездичка.

По-долу е процентът на хомоложност между вирусните изолати по отношение на НТО.

Основните генотипове са хомоложни с 65-70%, подтипове (подтипове) - с 77-80% и генетични варианти в един изолат - с 95-97%. По-късно през 2005 г. експертна група изясни класификацията на НСV [26]. Препоръчва се да се запази терминът "генотип", вместо "глинените", предложени от някои изследователи. При типизиране на вирусни изолати трябва да се анализира областта на ядро ​​/ Е1, NS5b генома и да се определи нуклеотидната последователност на цялата вирусна РНК, ако има подозрение за рекомбинация [27]. Всички известни изолати на HCV се класифицират в шест генотипа, а генотипите 7-10, въведени от някои изследователи, се считат за подтипове.

Най-запазената част от HCV РНК е 5-терминалната НТО-около 92% хомология [22]. Поради това консервативно място е възможно да се открие вирусна РНК в различни изолати чрез RT-PCR (обратна транскрипция на полимеразната верижна реакция) [28, 29]. В инфектиран организъм HCV съществува като набор от генетично незначителни, но близки родствени варианти, наречени quasispecies, разликите в чиято нуклеотидна последователност са няколко процента [30].

По време на инфекциозния процес вирусът претърпява имунна преса: някои варианти на HCV се отстраняват от имунната система на гостоприемника, докато други се появяват [31,32]. Нови варианти на вируса се появяват поради липсата на РНК-зависима РНК полимераза на HCV, коригиране на 3-5-екзонуклеазна активност [33]. Следователно, грешките, които възникват по време на репликацията на вирусна РНК, не се елиминират.

Повечето промени в нуклеотидната последователност на HCV РНК се намират в така наречените синонимни места, при които мутациите не засягат биологично важните свойства на вируса. Сравнението на синонимните сайтове ви позволява да установите разликата между вирусните варианти, които се сравняват. По този начин, когато се изследват изолати на HCV, изолирани в различни територии, се установи, че проникването на вируса в човешката популация вероятно е станало преди около хиляда години [34,35].

Първият елемент на HCV генома, 5-терминалния НТО, се състои от 341 нуклеотидни остатъка и изпълнява важни биологични функции. Тази област осигурява взаимодействието с вирусна РНК рибозоми 40S субединицата да формира комплекс структура свързващ сайт, наречен на английски съкращението IRES (вътрешно място за влизане в рибозом) [36]. IRES HCV има сложна пространствена структура (фигура 2) [37, 38].

- 480 60-140-440-5500

Фиг. 2. Схема IRES вторична структура с четири основни области (I-IV), pseudoknot, първични (1) и по-нататък (2) кодоните, дадени с незначителни промени от статията D.M. Forton и съавтори [38].

След свързване с HCV IRES рибозом 40S субединицата на транслационния старт образуване на активен комплекс и транслацията на вирусния геном на механизма за ограничаване независим [37, 39]. За да се започне транслацията, AUG кодона се използва в позиция 342 (Фигура 2). Установено е, че взаимодействието на вирусната РНК и 40 рибозомни субединици в последните сложни конформационни промени случи, който е уникален процес [40].

За транслацията на HCV генома са необходими обичайните (канонични) клетъчни фактори на иницииране eIF2 и eIF3. Тъй като активен комплекс се образува транслационно бавно, началната скорост на транслация е ниска, но увеличава взаимодействието на плюс верижен РНК noncanonical протеини на клетъчен активатор, като например антиген La, хетерогенна ядрен рибонуклеопротеин L, и рибозомна протеин rpS5 няколко неидентифицирани клетъчен протеин [41-44 ].

Способността на IRES на HCV да се свързва с рибозома може да инхибира определени клетъчни протеини, пептиди и витамин В12 [45-49].

Кратките РНК, наречени кратки интерфериращи РНК, които са допълващи към обектите на IRES, се свързват с него, спират предаването на генома на вируса [50]. Показано е, че антивирусният ефект на алфа, бета и гама интерферони също се проявява на ниво IRES-медииран превод [51]. Установено е, че HCV има специфични за тъканите различия в структурата на IRES [38, 52, 53]. Възможно е това да е един от начините, които гарантират устойчивостта на вируса в клетките на много тъкани.

При репликацията на HCV генома се образува РНК с отрицателна полярност, наречена отрицателна РНК верига. Той е нестабилен, разцепен от клетъчни ензими (за 30 минути с почти 60%) [54]. В инфектираната клетка съотношението на плюс и минус на RNA е 10: 1 [55]. За ефективна репликация на вирусния геном е необходим клетъчният протеин РТВ (полипиримидин траен-свързващ протеин), свързващ пътя на полипиримидин РНК [56]. В експерименти с модели се установява, че около 1000 копия на РНК плюс вериги и около 100 копия на RNA минус вериги се формират за всяка инфектирана клетка на ден [57].

Последният елемент на генома - 3-терминал NTO - участва в инициирането репликация (мястото на започване намира в minustsepi РНК), и регулиране на транслация в стабилизиращ геномна РНК [41, 59-61]. В структурата на 3-терминалния НТО се разграничават три елемента:

1) кратка секция на променлива последователност, състояща се от 40 нуклеотидни остатъци, 2) poliuridinovy ​​тракт, съдържаща 36 или повече остатъци уридин, и 3) уникален консервативен участък X, състоящи се от 98 нуклеотиди [60]. Област X има сложна вторична структура, в която са изолирани една дълги и две къси примки [61]. Установено е, че този регион е пряко участие в образуването на репликативна комплекс, регулиране на иницииране на транслация и репликация [41, 62, 63].

1.2. Структурата на вириона В ранните експерименти с HCV филтруване през филтри с различен диаметър на порите е показано, че размер на вириона от 30 до 60 нм, което съвпада с данните от електронна микроскопия анализ на вируса в биологични проби [64, 65]. В началото на 1990 от серума на хора с хепатит С са били изолирани РНК-съдържащи частици, които, когато градиент ултрацентрофугиране концентрирани в пет области в обхвата на плътност 0,95-1,21 г / мл [66-68]. Всяка от тези зони се използва за инфектиране на шимпанзетата [68]. И се оказа, че зоната с плътност от 0.95-1.10 g / ml има най-висока инфекциозност. Това необичайно ниска плътност вирусни частици се обяснява HCV асоциация със серумни липопротеини с ниска плътност (LDL) и с много ниска плътност (VLDL) [19, 66].

Липопротеините са сферични частици, образувани от монослой от фосфолипиди с холестерол включвания и аполипопротеини В и Е, вътрешната кухина е запълнена с частици триглицериди [69]. Основната функция на липопротеините е доставянето на триглицериди и холестерол в различни клетки. синтез липопротеин среща в ендоплазмения retirulume (EPR) хепатоцитите където те вероятно взаимодействат с belkovolipidnoy HCV плик, образуващи комплекс [70]. Много HCV плик на вируса, отговорен за образуването на комплекс с LDL / VLDL, все още не е установена. Този комплекс се нарича липовирусни частици. Вирионите в комплекса са защитени от вирус неутрализиращи антитела и могат да проникнат в хепатоцити, използвайки рецепторите за LDL [68]. Около 75% от циркулиращите в кръвта липопротеини се връщат в хепатоцитите чрез специален рецептор за LDL; останалите попадат в хепатоцитите по друг начин. Установено е, че около 20% от вирионите не са свързани със серумните липопротеини [71].

Проучване на устойчивостта на HCV към органични разтворители, A.M. Prince и колеги са показали, че вирусът е липид-белтъчна обвивка, която се образува на клетка гостоприемник липид и протеини, вирусни повърхностни [72]. През следващите години, HCV структура беше пречистен чрез висока резолюция електрон микроскопски анализ на чернодробни биопсии на пациенти с хепатит С и синтетични вирусоподобни частици (HPV). HPV се формират след експресията на фрагмент от HCV генома (наречен репликон) в различни вектори. Както са използвани везикулозен стоматит вирус вектори, бакуловирус и ваксиния вирус [73-75]. При включена в генома на ретровирус (HIV или левкемия вирус на мишки) нуклеотидна последователност, кодираща плик протеини на HCV, могат да получават psevdovirusnye частици (HPV), в черупка, която съдържа най-Е1 и Е2 протеини на HCV, както и всички други елементи от частиците са ретровирусна [76, 77 ]. Използването на HPV улеснява изследването на възела на морфологията и HCV, както и за изследване на свойствата на неговите протеини. По-специално, размерите са посочени диаметър вирион от 50 нм, което съответства на текущите данни, получени при изследването на нативен вирус, изолиран от пациенти с хепатит С [78, 79].

На фиг. 3 е електронен микрограф на HPV, получен чрез трансмисионен електронен микроскоп [79].

Фиг. 3. Електронна микрофотография с отрицателен контраст на HPV [79].

Отдолу наляво, с по-силно увеличение, се показва един вирион с Т-образни повърхностни протеини.

Под обвивката на HCV е нуклеокапсид, който се образува от основен протеин и съдържа вирусна РНК (Фигура 4). Размерите на нуклеокапсида, определени чрез електронен микроскопски анализ на вирусни частици с неформална обвивка, са 33-40 nm [74].

Досега не е възможно да се изолира HCV в количество, достатъчно за подробното му изследване, било от болни хора, или от шимпанзета. Това се дължи на ниското съдържание на вируса, неговата хетерогенност, както и способността да се образуват комплекси с антитела и кръвни липопротеини. Първият доклад за култивирането на HCV върху трансплантируеми клетъчни култури е направен от P.G. Deryabin и съавтори през 1997 г. [81]. През 2005 г. четири групи изследователи публикуват експериментални данни за експресията на вируса в трансплантируеми клетъчни култури с производството на инфекциозни вирусни частици [82-85].

Морфогенезата на HCV се среща в мембраните на ендоплазмения ретикулум, вакуолите на Golgi апарат и цитоплазмата на клетката. Структурните протеини на вируса се отцепват от полипротеина чрез клетъчни ензими (сигнални пептидази и пептид-пептидази). Основният протеин остава на цитоплазмената повърхност на EPR и в липидните вакуоли на цитоплазмата и протеините на обвивката частично проникват във вътрешната кухина на EPR.

В ендоплазмения ретикулум протеините Е1 и Е2 образуват комплекс и претърпяват обработка, която вероятно завършва в секреторните вакуоли на Golgi апарата. Нуклеокапсидът след опаковане на РНК се покрива и вирусът се приготвя в EPR цистерни. Въз основа на резултатите от чернодробния биопсичен анализ на пациенти с CHC V. Falcon и съавтори предполагат, че крайните етапи на вирусната морфогенеза се появяват в EPR-подобни везикуларни цитоплазмични структури [86]. Формираните вирусни частици напускат клетката в секреторните вакуоли [87].

Скоростта на образуване на вирион при пациенти с хронична HCV инфекция може да достигне 1012 частици на ден, а полуживотът на вирионите в кръвта е около 3 часа [88].

Глава 2. хепатит С вирус антиген подемните белтъци на обвивката са HCV Е1 и Е2 протеини, нуклеокапсид и неструктурни протеини NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5b.

В допълнение, по-малки полипептиди се предават също от вирусния геном: пептид р7, протеин F и малко изследван полипептид с молекулно тегло от около 8 kDa [89].

Последните два второстепенни белтъка се синтезират в резултат на четене на генетична информация от допълнителни иницииращи кодони, локализирани в областта на генома, кодиращ основния протеин [22]. Установено е, че малко изследван полипептид с молекулна маса от около 8 kDa се чете от кодон 2 (виж фигура 2). Подреждането на HCV протеини в ЕРР мембраната е показано на Фиг. 5.

Пептидът р7, наречен също виропорин HCV, образува хептамери, които образуват катио-специфичен канал, чието значение в биологията на вируса все още не е напълно изяснено [91]. Предполага се, че той участва в ранните етапи на морфогенезата на вируса. Напоследък е показан ефектът на пептида р7 върху инфекциозните свойства на HCV [92].

Протеинът F се синтезира чрез преместване на четящата рамка на генетичния код към един нуклеотиден остатък (новият иницииращ кодон започва от 341-ия нуклеотиден остатък, виж Фигура 2) и има

EPR кухина Фиг. 5. Подреждането на HCV протеини в EPR мембраната се дава с леки промени от статия Б. Lindenbach и C.M. Ориз [90].

консервативна аминокиселинна последователност [93, 94]. Една хипотеза за участието на този протеин в развитието на устойчиви VGSinfektsii [94, 95]. Може би има връзка между F протеин и появата на чернодробна стеатоза при хроничен хепатит С е показано, че антитела срещу този протеин са открити само в 10% от пациентите с хроничен хепатит С, но ако тяхното развитие на скоростта на откриване чернодробна стеатоза на тези антитела увеличава трикратно [96], Понастоящем се провежда интензивно изследване на биологичните функции на малките протеини на HCV.

2.1. Структурата, функцията и гликопротеин от обвивката епитопи Облицовъчен Е1 протеини (Ako 192-383) и Е2 (Ako 384-746) са фрагменти на полипротеина са разположени за средната част (ядро) протеин (вж. Фиг. 1) [97, 98]. Според електрофоретичен анализ, молекулно тегло на протеина Е1 е 31 Ша, Е2 - 70 Ша. И двата протеина принадлежат към трансмембранни протеини и съдържат въглехидратни остатъци [97]. Основните функции на тези протеини

- взаимодействие с рецепторите и осигуряване на проникването на вирусния геном в цитоплазмата на клетката.

Биосинтезата на HCV протеините се осъществява върху рибозоми, свързани с EPR. Поради специален сигнал за транслокация, по-голямата част от полипротеиновия участък, съответстващ на протеини Е1 и Е2, навлиза в кухината на EPR цистерните. Там клетъчните сигнални пептидази разцепват тези протеини един от друг, както и от основния протеин [62, 97-99]. (Пептидази сайтове действие са показани на Фиг. 1.) След това HCV белтъци на обвивката остава свързан към мембраните, поради трансмембранни участъци EPR локализирани в СООН-терминалните региони на веригите на полипептидни [99, 100].

Сложният процес на пространствено подреждане или сгъване на протеини Е1 и Е2 започва едновременно с превод и завършва след него. Основните етапи на сгъването на протеини Е1 се провеждат в продължение на 1 час с помощта на клетъчния протеин-чаперон калнексин, който с него образува краткосрочен комплекс [101, 102]. С участието на калнексин от осем цистеинови остатъка на гликопротеин Е1 се образуват четири дисулфидни (S-S) връзки. За още един час пространствената структура на гликопротеин Е1 се стабилизира [103].

Сгъването на протеин Е2 е по-дълго (около 4 часа), отколкото за протеин Е1.

Очевидно това се дължи на наличието на цистеинови остатъци в молекулата 18-20, които могат да образуват 9-10 дисулфидни връзки и интензивното гликозилиране на Е2 протеина [104]. Пространственото опаковане на протеина Е2 се осъществява с участието на калнексин и неидентифицираните чаперони, както и протеин Е1 [103, 104].

Предполага се, че когато е завършено, 8-9 дисулфидни връзки в един полипептид и една S-връзка между двата E2-E2 полипептида се образуват в Е2 протеина.

Комплексът от Е1-Е2 черупкови протеини се образува без появата на ковалентни връзки [103-105]. Стехиометрията на този комплекс все още не е установена, вероятно преобладаващият компонент е Е2 протеин [104]. Не винаги протеин сгъване и образуването на сложни обвивка гликопротеини се извършва правилно, неправилно сглобени Е1 и Е2 протеини и комплекси от тях се намират в EPR резервоари като високомолекулни агрегати [105].

Под действието на клетъчните ензими в мрежата на EPR, протеините Е1 и Е2 са гликозилирани, образувайки т.нар. Хитобиозен кортекс [97].

Процесът на гликозилиране започва едновременно с нагъването на протеините и завършва във вакуолите на Golgi апарата. Гликозилирането осигурява правилното пространствено опаковане, образуването на специфична антигенна структура и появата на биологична активност в обвитите гликопротеини. В допълнение, след гликозилиране протеините Е1 и Е2 могат да бъдат секретирани от клетките и са по-добре защитени от някои протеолитични ензими на клетката.

И двата HCV гликопротеин са трансмембранни протеини тип I, които се характеризират с присъствието на NH2-терминал ектодомен (т.нар протеин част, изложени от липидна двуслойна мембрана на вируса) и СООН-края на трансмембранната област. един или два трансмембранни верига участва в образуването на Е1-Е2 сложни и задържащи гликопротеини в открити в вирус Е1 и Е2 протеини [106-108] на липидните двуслойни мембрани.

Напоследък учените обръщат голямо внимание на търсенето в обвитите гликопротеини на HCV слетия пептид, който комбинира липидните двойни слоеве на ендозома и вируса. За HCV, модел (който е частично потвърден) на проникване в клетката се предлага по аналогия с процеса, характерен за вируса на енцефалит, породен от кърлежи. Според този модел при контакт на HCV с рецептора се образува вирусо-рецепторен комплекс, който като ендоцитна вакуола прониква в клетката (този процес се нарича също рецептор-медиирана ендоцитоза). На следващия етап ендоцитозният вакуол се слива с ендозома (цитоплазмена везикуларна клетъчна структура), който се характеризира с ниски стойности на рН. Под влияние на киселинната среда на ендозома, повърхностните гликопротеини на HCV преминават конформационни промени, водещи до излагане и въвеждане на слетия пептид в ендозомната мембрана. Този процес задейства сливането на липидния двуслой на вируса и ендозомната мембрана, което завършва с освобождаването на HCV РНК в цитоплазмата на клетката.

Досега не е установено кой от двата гликопротеина на обвивката на HCV е пептидът на сливането. Има няколко предположения за локализацията му в протеина Е1: в областта с аминокиселинни остатъци 265-287 или 272-281, или 275-293 [107, 109]. Установена сходство в първичната структура на предназначението пептид HCV подтип 1a (Ako 265-287), със същите пептиди в някои представители на семейството Flaviviridae (фиг. 6) [109].

В гликопротеин Е1 на HCV са идентифицирани четири места на N-гликозилиране: това са аспарагинови остатъци в позиции 196, 209, 234 и 305 [110-112]. Прилагането на метода на точкови мутации в вирусната РНК, кодираща протеин Е1 е в състояние да покаже, че изчезването на местата за гликозилиране в позиции 209 и 234 не влияе на образуването на Е1-Е2 комплекс [110, 113]. Олигозахаридни остатъци

Фиг. 6. Първична структура на слетия пептид в отделни членове на фамилията Flaviviridae [109].

TBE - енцефалит от кърлежи вирус, VZHL - вируса на жълтата треска, VYAE - вирус на японски енцефалит, на ден - тропическа треска, Кунви окръг - Куня вирус, вирус Западен Нил - западнонилска треска. HCV подчерта остатъци обща аминокиселина (две два цистеинови и глицин), наклонен аминокиселинни остатъци, подобни на техните физико-химични свойства.

в позиции 196 и 305 са необходими за правилното пространствено подреждане на Е1 протеина, както и за образуването на Е1-Е2 гликопротеинов комплекс. В допълнение, въглехидратните остатъци в позиция 196 и 209 на гликопротеин Е1 показват, че са необходими за поддържане на инфекциозността на вируса [112].

На фиг. 7 представлява хипотетичен модел на пространственото подреждане на Е1 протеина, изчислен от данните на протеомичен анализ, компютърна симулация и сравнителен анализ с обвитен протеин Е от вируса на енцефалитен кърлежи.

Олигозахаридните вериги на HCV гликопротеините се образуват най-често от 6-9 манозни остатъка, прикрепени към два остатъка от N-ацетилглюкозамин [114, 115]. Само Е2 протеин открива повече олигозахариди комплекс тип с по-малко манозни остатъци, които частично замества фукозни и N-ацетилглюкозаминови остатъци са в крайна позиция на веригата на олигозахарид [115].

В гликопротеин Е2 открити 11 места на гликозилиране на аспарагинови остатъци в позиция 417 (1) 423 (2) 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 (8 ), 576 (9), 623 (10) и 645 (11) [111, 112, 115].

Показано е, че комплексът от гликопротеини Е1-Е2 не се образува, ако

Фиг. 7. Схемата на предложената пространствена структура на Е1 протеина е представена в лесна модификация от статията на R.F. Гари и С. Даш [107].

Легенда: въже - полипептидна верига, цилиндри - алфа спирала, стрелки - бета структура, тридесети - олигозахаридни вериги, черни сегменти - дисулфидни връзки.

няма олигозахаридна верига в позиция 10 на HCV Е2 протеина.

Вирусът губи своята инфекциозност, ако няма гарбопротеинови остатъци в гликопротеин Е2 на позиции 1, 2, 4, 8, 10 и 11 [111]. В допълнение, беше установено, че олигозахаридни вериги в позиции 1, 6 и 11 участват във формирането на епитопи, върху които се образуват вирусно-неутрализиращи антитела [108, 116].

Установено е, че вируси от подтип 1а и За се различават по броя на олигозахаридни вериги в обвити протеини [117]. В гликопротеин Е2, за разлика от Е1 протеина, има модифицирани олигозахаридни остатъци на позиция 423 и 430 [115, 116].

Гликопротеин Е2 е трудно да се изследва чрез физикохимични методи на анализ на протеинова структура, главно поради голямото количество въглехидратни остатъци. Изобилието от олигозахаридни вериги в гликопротеин Е2 затруднява получаването на протеинов кристал за рентгенов дифракционен анализ и провежда ядрено-магнитен резонанс. Следователно, вторичен модел структура е направена за пресечена форма (ектодомейн) Е2 протеин с помощта на компютърни програми, които предсказват протеин сгъване и сравнителен анализ на вече проучен обвити Flaviviridae семейството протеини [112]. Това е фрагмент от ектодомейна, гликопротеин Е2 (Ako 384-660) без да трансмембранен част, която има много биологични свойства, присъщи на пълна дължина Е2 протеин. Той може да образува комплекс с гликопротеин Е1, реагира с моноклонални антитела към конформационни епитопи на протеин Е2, както и хепаран сулфат и някои клетъчни рецептори.

В този пространствен модел на ектодомен на гликопротеин Е2, предложен от A.T. Yagnik et al., Разкриват ниско съдържание на вторични структурни елементи (около 37%) и преобладаване на неподредени места [113]. Елементите на вторичната структура са представени главно от бета-сгънати участъци и няколко къси алфа-спирални фрагменти. Това е първият и досега единствен модел на гликопротеин Е2, който очевидно отразява реалната му вторична структура с известно приближение. С оглед на сложността и двусмислието на този модел той не е ясно представен.

Една от основните характеристики на първичната структура на протеина Е2 е наличието на региони с неконстантна аминокиселинна последователност, които се наричат ​​променливи и хипервариабилни [118, 119]. В протеина Е2 са открити три области с много висока честота на аминокиселинни замествания, които са хиперпроменливи региони (HWRs). Произход HWR локализиран в NH2-терминалната част на протеина Е2 на мястото на аминокиселинни остатъци 384-411, HWR втората - на сайта с остатъци 474-482 и третият открити наскоро, - на сайта с остатъци 431-466 или 434-450 [120- 122].

Установено е, че първият HWR, въпреки високата честота на аминокиселинните замествания, винаги запазва общия положителен заряд и стабилния профил на хидрофилност / хидрофобност.

В допълнение, неговите четири аминокиселинни остатъка в позиции 385, 389, 406 и 409 са много консервативни, т.е. те се срещат много често в изследваните изолати на HCV [123, 124]. Всички различни варианти на аминокиселинна последователност на първата HWR може да се редуцира до консенсусната последователност, която се състои от най-често срещащи се аминокиселинни остатъци във всяка една от 27 позиции (384-411) на частта протеин Е2 [124, 125]. Биологичната роля на първия HWR е да се осигури най-ранните етапи на HCV сорбция върху повърхността на клетката и в "подвижната цел" представяне на имунната система, която се формира от непрекъснато променящите се нови антигенни варианти на този протеин E2 област [31, 123, 126].

Има доказателства, че вторият и третият HRV участват във свързването на HCV към клетъчните рецептори [121, 127].

Благодарение на вариабилността на аминокиселините на всичките три хиперпроменливи участъка на гликопротеин Е2, се формират така наречените неуловими варианти на вируса, т.е. такива, за които в момента няма имунен отговор.

Друга характеристика на протеина на обвивката Е2 - наличието на сайтове на полипептидни вериги, които имат сходства с други протеини.

Това явление се нарича молекулярна мимикрия. По този начин, дванадесет консервативни аминокиселинни остатъци (позиции 660-671) Е2 протеин домейни образува RePHD идентичен фосфорилирани места в рибозомна фактор иницииране на транслация eIF2a [128]. Поради това сходство, HCV може да спре антивирусния ефект на IFN-алфа. Протеин киназата R след активиране с интерферон-алфа трябва да фосфорилира фактора eIF2a, който на свой ред води до спиране на транслацията на HCV РНК. Но протеинът Е2, използвайки домейна ReHDD, взаимодейства с протеин киназа R вместо с фактора eIF2a, а биосинтезата на вирусните протеини продължава [129].

В NH2-крайната част на Е2 протеина се наблюдава молекулярна мимикрия със сечения на леките и тежките вериги на имуноглобулините и с Т-клетъчния рецептор [118]. Предполага се, че тази структурна прилика може да бъде причина за пациентите, инфектирани с HCV на автоимунни заболявания като тип II смесена криоглобулинемия и В-клетъчен неходжкинов лимфом [130].

Както е споменато по-горе, обвитите протеини на HCV осигуряват взаимодействието на вируса с клетъчните рецептори. Беше установено, че тези остатъци олигозахарид обвивка гликопротеини могат да играят основна роля в свързването на вируса с неговите потенциални рецептори като DC-SIGN (CD209), L-SIGN (CD209L) и азиалогликопротеиновия рецептор [117, 131, 132]. Първите два потенциални рецептора са лектинови протеини тип С и функционират като повърхностно адхезионни молекули, които осигуряват клетъчни контакти между дендритни, ендотелиални и Т-клетки. L-SIGN рецептор присъства на повърхността на ендотелните клетки на хармоници на черния дроб и лимфните възли, и DC-ЗНАК - на дендритни клетки повърхност. Тези рецептори имат специални калциево-зависими домени за разпознаване на въглехидрати (CRD), които могат да се свързват с въглехидратните остатъци на Е1 и Е2 протеините [117, 131]. Тъй като DC-SIGN и L-SIGN рецепторите не се намират в хепатоцитите, те не могат да се разглеждат като основни цели на HCV. Тези рецептори улавят, акумулират вируса и го предават на Т клетки и евентуално на хепатоцити.

Азиалогликопротеиновият рецептор присъства на повърхността на чернодробните клетки и позволява проникването на гликопротеини, които нямат остатък на сиалова киселина в края на въглехидратните вериги. С този рецептор, рекомбинантни протеини Е1 и Е2, получени чрез експресиране на съответни фрагменти на HCV РНК в клетки на насекоми, са специфично свързани [132].

Установено е, че рекомбинантният Е2 протеин взаимодейства с друг потенциален вирусен рецептор (или ко-рецептор), трансмембранен CD81 протеин [133]. Този рецептор присъства на повърхността на повечето клетки (с изключение на еритро и тромбоцити) и участва в клетъчните функции, свързани с адхезия, мобилност, метаболитно активиране и трансформация. CD81 принадлежи към тетрапаниновата протеинова група и има характерна структура: 4 трансмембранни нишки и голям и малък извънклетъчен цикъл. Беше показано, че голям извънклетъчен цикъл CD81 специфично се свързва с рекомбинантния Е2 вирусен протеин [133].

В А.Т. Yagnik и съавторите в това взаимодействие включват два повърхностни участъка на протеина Е2 с като 474-494 и 522-551 [112]. Обаче в едно по-късно изследване бе установено, че аминокиселинните остатъци на протеин Е2 в позиции 420, 527, 530 и 535 влизат в контакт с голямата бримка на CD81 [134].

Експерименти с HPV, HPV и нативен вирус от серума на пациенти с СНС потвърдиха, че CD81 участва в процеса на навлизане на HCV в клетката, но освен това трябва друг протеин, който стимулира ендоцитоза [77, 78, 134]. Използвайки CD81 и този протеин, вириони, които не са свързани с липопротеини, ще навлязат в клетката, защото е необходим контактът на вирусния гликопротеин Е2 и CD81. Известно е, че съдържанието на такива вириони е около 20% (вж. Раздел 1.2). По този начин клетката може да проникне в вириони, които не са свързани с липопротеини, тъй като образуването на HCV комплекс с тях очевидно предотвратява контакт с Е2 гликопротеин CD81 рецептор на.

До 80% от HCV е в тялото на заразените хора под формата на комплекс с липопротеини (това са така наречените липовирусни частици). Тези частици навлизат в клетките с помощта на рецептор за LDL (виж раздел 1.2) и друг SR-BI рецептор (друго означение е Cla-1) [126]. SR-BI рецепторът се намира на повърхността на много клетки, но най-високото му съдържание се забелязва в черния дроб и стероидните тъкани. Основната функция на този рецептор е да доставя на клетките липидите, които изграждат липопротеините с висока плътност. SR-BI рецепторът принадлежи към трансмембранни протеини. Той има две мембранни нишки, голям извънклетъчен контур и две къси цитоплазмени участъци в NH2- и COOH-крайните участъци [135]. Установено е, че първият HVR на рекомбинантен протеин Е2, HPV и вирус, получен от клетъчна култура, може да бъде свързан с този рецептор [136-138]. Въпреки това, HCV от кръвния серум на хора с хепатит С взаимодейства със SR-BI рецептора без участието на първия HWR и протеина Е2 [118].

За да се обясни това явление, се предполага, че вирусът прониква в клетката, използвайки многокомпонентен рецепторен комплекс, образуван от CD81-SR-BI [77, 138].

Известно е, че отрицателно заредени въглехидратни вериги на повърхностните гликопротеини на клетката могат да служат като центрове за първично свързване на различни вируси [139]. Благодарение на този процес вирусното съдържание на клетъчната повърхност се повишава и вероятността за взаимодействие му със специфичен рецептор се увеличава. Експериментите за свързване на HCV с хепатоцитни клетъчни култури показват, че този процес може да бъде блокиран от хепарин и сурамин, имащ отрицателен заряд [140]. Частта, която специфично се свързва хепарин, вероятно локализиран в първия HWR гликопротеин Е2 и / или в район с Ako 559-614 където разкрива високо съдържание на положително заредени аминокиселинни остатъци [112, 126]. Въпреки това, при експерименти с псевдовирусни частици на HCV, не се наблюдава взаимодействие на Е2 протеин с хепарин [141]. Очевидно, участието на глюкозаминогликаните в сложния процес на проникване на HCV в клетката изисква допълнително проучване.

Както се вижда от изследванията, проведени през последното десетилетие, HCV има широка клетка тропизъм. Вирусът се репликира в хепатоцити, периферни мононуклеарни клетки и асцит, лимфа и моноцити [142-144], дендритни клетки [52, 145], хематопоетични прогениторни клетки [146], микроглия [38] кардиомиоцитите [147], чревния епител [ 148], остеобласти [149] и в-клетъчните фоликули на лимфните възли [150]. Това вероятно е причината да има повече от един рецептор за HCV.

В анализа на техните антигенни и имуногенни свойства се обръща голямо внимание в изследването на черупкови протеини, тъй като тази информация е необходима за разработването на ваксини срещу хепатит С.

Установено е, че гликопротеините Е1 и Е2 притежават висока имуногенност. Така, при имунизиране на шимпанзета с рекомбинантни протеини на обвивката, бяха получени специфични антитела към тези протеини с титър 1/819200 [15]. Въпреки това, при естествения ход на остър и хроничен хепатит С при хора, хуморалната реакция към вирусните гликопротеини Е1 и Е2 е много по-слаба.

Публикуваните данни за откриването на линейни В-епитопи в протеини Е1 и Е2 са представени в Таблица. 1. За анализа на тези епитопи са използвани методите за пептидно сканиране, показване на фаги и моноклонални антитела. Методът за пептидно сканиране се основава на използването на синтетични пептиди, покриващи цялата аминокиселинна последователност на протеина и определяне на тяхната имунореактивност, т.е. способността за взаимодействие с антитела на пациенти с хепатит С. За първи път такова проучване на протеините на обвивката на HCV е извършено в корпорацията Chiron (САЩ) [151]. По-късно, през 1997 г. бяха публикувани резултатите от пептидното сканиране на гликопротеини Е1 и Е2, в които

Уникалните серуми от жени, инфектирани преди 17 години с единичен изолат на HCV, които замърсили лекарството с анти-D имуноглобулин, бяха използвани [152].

Чрез усилията на три групи изследователи, водени от Дж. Дюбюсън, М. Флинт и А.Х. Patel, банка миши и човешки моноклонални антитела, е създадена (ICA) за HCV, с които може да се идентифицира някои линейни и конформационни епитопи В-обвивката Е1 и Е2 протеини [79, 109, 153-155].

На фиг. 8 показва разположението на В-епитопи в гликопротеин Е2, открити с помощта на MCA.

От особен интерес са В епитопите, свързването на антитела, което води до неутрализиране на вируса. Такъв вирус неутрализиращ епитоп се открива в първия HBP на протеин Е2 [156].

Друг епитоп, който неутрализира свързването на вируса към клетката (така наречения NOB епитоп от "неутрализирането на свързването"), е

Фиг. 8. Разположение на В-епитопи, открити от MCA в протеин Е2.

Схемата се дава с леки промени в публикациите на R.F. Clayton et al. [79] и A.M. Owsianka et al. [155].

В горната част на правоъгълниците е MKA, разпознаващ ектодомейна на Е2 протеина, E2 протеина с пълна дължина в комбинация с Е1 и Е2 протеина в HPV състава. По-долу са показани MKA, взаимодействащи с ектодомен на Е2 протеин или с протеин Е2 с пълна дължина в комплекс с Е1 протеин. В черно, MCA инхибиращо свързване към CD81 ектодомейн Е2, протеин с пълна дължина Е2 в комбинация с Е1 и HPV е маркиран в черно. Сивият цвят се отбелязва чрез MCA, което подтиска свързването на HPV с CD81.

конформационен структура в образуването които по предположение, една група от автори участват аминокиселинни остатъци 406-644 на протеиновата последователност Е2 [76, 156, 157], и съгласно друга - остатъци от последователностите, 414-443 и 490-519 [158 ].

Показано е, че друг по-сложен конформационен В-епитоп, който не притежава вирусни неутрализиращи свойства, може да бъде образуван от аминокиселинни остатъци от 3 места:

297-306 протеин Е1, 480-494 и 613-621 протеин Е2 [167].

В гликопротеините Е1 и Е2 бяха идентифицирани Т-хелперни (CD4 +) и Т-убийни (CD8 +) епитопи (Таблица 2).

Понастоящем продължават изследванията за локализирането и структурата на В- и Т-епитопите на протеините на обвивката на HCV. Информация по тази тема можете да намерите на уеб сайта на Националната лаборатория в Los Alamos (САЩ): http://hcv.lanl.gov.

* Ако 20-членен пептид се използва за определяне на епитопа, то няма точна локализация.

2.2. Нуклеокапсиден антиген Схемата за локализиране на нуклеокапсидния протеин (синоними: сърцевина, ядро) в полипротеина е показана на Фиг. 1. Този протеин е замесен в ключови етапи на морфогенезата на вируса: създава вирусни нуклеокапсид инициират HCV РНК опаковане и монтаж на вирусната обвивка [74, 178, 179].

Вероятно, cor протеинът притежава други биологични функции. По този начин, в различни моделни експерименти показва, че взаимодейства с регулаторните протеини и някои структурни елементи на клетка: р53 протеин [179], първи рецептор за фактор на туморна некроза [180] рецептор, лимфотоксин бета [181], транскрипционно LZIP фактор [182 ], STAT3 протеин (който повишава транскрипцията сигнал) [183], хетерогенна ядрен рибонуклеопротеин К [184] хеликаза DDX3 [185] цитоплазма триглицериди везикули [186], митохондрии [187] цитокератин клетки [188]. Смята се, че korbelok участва в развитието на стеатоза и hepatocarcinogenesis при пациенти с хроничен хепатит С, [179, 186].

Нуклеокапсиден протеин първо се формира между всички вирусни протеини по време на биосинтеза, се отцепва от полипротеин чрез сигнални пептидази клетки [190]. В крайна протеолитична хидролиза арматура протеин участва наскоро открит сигнален пептид пептидаза SPP, извършване на необичайно междумембранно разцепване [189, 190].

Обработката на нуклеокапсидния протеин е придружена от прехода на неговата форма p23 (193 към) към р21 (173) и фосфорилирането с ОН групи от серинови остатъци [189]. Разцепеното място (174-193) носи сигнал за транслокация, през който NH2-крайната част на протеина Е1 навлиза в ESR цистерните [191].

Зрелата форма на cor протеин има добре дефинирана амфипатна структура: хидрофилен NH2-краен участък и хидрофобен COOH-терминален участък [192]. Съответно домейна D1 (хидрофилен) и домен D2 (хидрофобен) са изолирани в протеина. Подобна структура е характерна за нуклеокапсидните протеини от фамилията Flaviviridae. Понякога третият домен (централен), който има необичайно високо съдържание на триптофанови остатъци, също се изолира в кортикостерола (46).

В хидрофилния домен на D1 има RNA свързващо място, главно консервирани В епитопи и фрагмент, отговорен за образуването на димера на основния протеин [192]. Функционално активната форма на нуклеокапсидния протеин се образува от две полипептидни вериги, т.е. кортиков протеин е димер, в който преобладава алфа-спиралната структурна организация. Хидрофобният домен D2, който осигурява връзка с липидните мембрани и в цитоплазмата включвания са открити амфипатично алфа-спирала с изразени хидрофилни и хидрофобни повърхности.

Сред всички вирусни протеини кортикостеролът има най-високо съдържание на консервативни зони в първичната структура [193].

Разположение на главното функционално важните сайтове нуклеокапсиден протеин е показана на Фиг. 9. В тези важни области трябва да се отбележи област арматура протеин с остатъци 72-91 аминокиселина, която взаимодейства с протеин на обвивката Е1 [194] Частта с остатъци 69-104, необходими за запазване на инфекциозност на HCV [195] зона 65 остатъци -72, който е вероятно да се свърже с пептида Р7 в ранните етапи на морфогенеза на вируса [195].

Съгласно електронната микроскопия основният протеин се локализира в клетката върху EPR мембрани, върху липидните везикули в цитоплазмата, както и в ядрото. Трансфер-ядрен протеин в клетъчното ядро ​​носи транспорт протеин biparnin клетъчни NLS, който след това взаимодейства със специална сигнална последователност на протеина на ядрото [196].

Изследване на нуклеокапсиди от нативния серум и техните аналози, произведени с помощта на HCV репликон показва, че независимо от техния произход имат коефициент утаяване на около 100 S, градиенти подемните плътност в

Фиг. 9. Подреждането на основните функционално важни места в нуклеокапсидния протеин се дава с леки промени от статията на C.L. Murray et al. [195].

По-долу цифрите показват броя на аминокиселинните остатъци.

цезий 1,28 g / ml и диаметър 33-46 nm, определен с помощта на предавателен микроскоп [197, 198]. Според електрон микроскопски анализ на биопсии от човешки черен дроб CHC установено, че размерите на нуклеокапсидите вируса в този случай варира по-бързо 28-48 пМ [198].

Основният протеин е един от най-имуногенните антигени на HCV. Данни за неговите В- и Т-епитопи са дадени в Таблица. 3 и 4.

Трябва да се отбележи, че В епитопите на нуклеокапсидния протеин са концентрирани предимно в хидрофилния домен и в консервативните области.

2.3. Характеризиране на протеина NS2 NS2 протеинът се отнася до неструктурни HCV протеини, той се намира в полипротеина след пептида р7 (виж Фигура 1). NS2 протеинът има молекулно тегло от около 23 kDa, не съдържа въглехидратни остатъци и е свързан с EPR мембрани [206, 207]. Точната топография на протеините в мембраната не е установена, се предполага, че тя образува 3 трансмембранни нишки (виж Фигура 5) [90]. Протеин NS2 е слабо разтворим, така че е трудно да се изследва.

Основната биологична функция на протеина NS2 е разцепването на HCV серин протеазата. За неговото прилагане NS2 протеинът образува комплекс с полипротеиново място, съответстващо на протеина NS3 [206, 208].

Федерален университет "Казан (Приволжски"). NI Lobachevsky Нови записи на книги към Фонда на Националната банка от 27 юни до 4 септември 2015 г. Kazan Records се правят във формат RUSMARC с помощта на "Ruslan" ALIS. Материалът е подреден систематично според знанията, в рамките на разделите - в азбуката на авторите и заглавията. С обложката, резюмето и съдържанието на публикацията могат да бъдат намерени в електронен каталог. Неизвестно заглавие Материали на Всеруската конференция p. "

"МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ федерална държава Образователна институция за висше професионално образование" Тюмен държавен университет "Институт по биология, катедра Екология и генетика, ON Zhigileva екологична паразитологични учебни помагала. Работната програма за студенти по посока на подготовка 06.03.01 биология (ниво бакалавърска), профили на обучение "Био-екология", форма на обучение на пълно работно време Тюмен-членка. "

"Министерството на образованието и науката на държавната Образователна институция за висше професионално образование Тюмен държавен университет Институт по биология, факултета по зоология и Еволюционна животните Екология AV Толстиков, В.А. Столбов ЕНОТОЛОГИЯ Образователен и методичен комплекс. Работната програма за студенти по посока на подготовка 35.03.10 Ландшафтна архитектура, профил за обучение декоративни растения и детска стая, редовно обучение за форма на Тюмен. "

"МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ федерална държава Образователна институция за висше професионално образование" Тюмен държавен университет "Институт по биология, Министерство на човешката анатомия и физиология и животински Lepunova ON АНАТОМИЯ И ЧОВЕШКА МОРФОЛОГИЯ Образователен и методичен комплекс. Работна програма за студенти 06.03.01 Направления "Биология", профили: ботаника, зоология, физиология, генетика, биоекология, биохимия; форма на обучение. "

област "ОБЩИНСКА" Bezhanitsy "общински бюджетни общообразователни институции" Bezhanitsky ОУ "се споразумяха да се утвърди методически съвет №1 основните Протоколи от 8.27.2014 _ / SK MIKHEEV Пореден номер 71 от 29.08.201 работна програма за теми БИОЛОГИЯ основно общо образование, степен 6 от 2014-2015 учебна година майстор Ирина Vasilyeva Bezhanitsy 2014 1.Poyasnitelnaya бележката Работим по програмата за биология отговаря Федералната. "

"Министерство на земеделието на Руската федерация федерална държава образователна институция за висше професионално образование" Кубан членка Аграрен университет »Катедра по микробиология, вирусология и epizootology насоки за дисциплина: B1.V.DV.1" Ветеринарна Вирусология "за самообучение завършил курс по посока на 2 препарат 36.06.01 Ветеринарна и зоотехника, ориентиране: "Ветеринарна микробиология, вирусология. "

"Министерство на образованието и науката на Калуга област държавен бюджет институция на допълнително обучение на Калуга област" Регионално екологични и биологични център "Средно общообразователно обща програма в развитието" килерче на природата "за студентите от начална училищна възраст (7-11 години) Период на изпълнение -2 години Съставител учители от допълнително обучение : Timoshina E.V. Glebova S.V. Kaluga Съдържание Обяснителна бележка Приложимост на програмата: Цели и цели на програмата. "

«« ТЕОРЕТИЧНА МЕХАНИКА »Методически указания за практическо обучение по 2-ри курс на биомедицинския факултет през първата половина на 2012-2013 година. специалност 201000 - Биотехнически системи и технологии 1. Уводния урок. Уравнения на движение и траектория уравнение tochki.Reshite следните задачи: 1. Според уравненията на движение на точка от траекторията се уравнението в координатна форма и изберете посока на фигура 1) х = 3 т -5, у = 4 - две тон; 2) х = 2т, у = 8т2; 3) х = 3т2, у = 4т2; "

«Http://www.bio.bsu.by/zoology/shalapyonok_ru.phtml Page 1 Print Сайт на Биологическия факултет версия за печат или да се върнете Shalapenok Елена Семьоновна Министерството на Биологически факултет на БСУ зоология, персонал. ХОРА Катедра по зоология преподаване Преподаватели и подкрепа на научния състав на докторанти и студенти Shalapenok Елена Семьоновна (1931-2010) доцент, катедра д-р зоология, доцент Завършил беларуски. "

"МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ Пенза държавен университет Одобрен от: ректор _ АД Gulyakov '' _ 201, регистрационен номер intrahigh основни професионални образователни програми на висшето образование Посока на подготовка 020 400 биология квалификация профил Bioecology обучение (степен) завършил бакалавър Форма на обучение Краен Пенза, 2013 СЪДЪРЖАНИЕ 1 като цяло. 1.1 Основната професионална образователна програма на висшето образование. "

"Резюме на работната програма на тема" Биология "на 2014-2015 учебна година 9 клас Целта на работната програма - създаване на условия за планиране, организация и управление на учебния процес по предмета на биологията, вижте" Основи на обща биология ".Rabochaya програма включва следните раздели: Раздел 1. Обяснителен меморандум, в който се определят общите цели на общото образование в светлината на спецификата на темата. Работната програма се основава на приблизителна основна програма. "

"МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ федерална държава Образователна институция за висше професионално образование" Тюмен държавен университет "Институт по биология, катедра Екология и генетика, ON Жигилева БАЗОВЕ ЕКОЛОГИЯ Образователен и методичен комплекс. Работна програма за студенти в областта на обучението 42.03.02 Журналистика (бакалавърско ниво), профили на обучение "Печат", "Телевизионна журналистика", "Конвергентна журналистика". "

"Министерството на образованието и науката, федерална държава образователна институция за висше професионално образование Тюмен държавен университет Институт по биология Катедра по ботаника, биотехнологии и ландшафтната архитектура Марина V. Семенова Bioecological основен състав с растения учебни материали. Работна програма за ученици от посоката 35.03.10 Ландшафтна архитектура профил Пейзаж и пейзаж. "

"МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ федерална държава Образователна институция за висше професионално образование Тюмен държавен университет Институт по биология, Катедра по ботаника, биотехнологии и ландшафтна архитектура Belozerova A.A.MORFOBIOLOGICHESKIE ХАРАКТЕРИСТИКИ НА декоративна растителност учебни материали. Работната програма за студентите от направление 35.03.10 ландшафтна архитектура на пълно работно време профил на обучение и декоративни растения. "

"МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ федерална държава Образователна институция за висше професионално образование" Тюмен държавен университет "Институт на Департамента по зоология и еволюционна екология на животните ОА Алешина ОСНОВНА ОБРАЗОВАТЕЛНА ВСИЧКО-БИОЛОГИЧНА ПРАКТИКА: ЗООЛОГИЯ НА ИНВЕСТБРАТА Образователен и методичен комплекс. Работна програма за студенти в областта на обучението 06.03.01 - "Биология" (академичен бакалавър), профил на обучението. "

"МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ федерална държава Образователна институция за висше професионално образование" Тюмен държавен университет "Институт по биология, Министерство на човешката анатомия и физиология и животински Lepunova ON МОЛЕКУЛНА БИОЛОГИЯ НА ВИРУСИТЕ И ДРУГИТЕ ИНТРАКУЛУЛАРНИ ПАРАЗИТИ Образователен и методичен комплекс. Работна програма за студенти 06.03.01 Направления "Биология", профил: биохимия; форма на образование - на пълно работно време Тиумен. "

"Федералната агенция по биомедицинско на Държавна организация здраве" на Медицинския център на Федералната агенция за медицински и биологичното сибирска "(FGBUZ SOMTS FMBA на Русия) стандарти и технологии ПРАКТИКА СЕСТРИ Указания професионални дейности на медицинска сестра процесуално Новосибирск 2013 Федералната агенция по биомедицински ФЕДЕРАЛНА ДЪРЖАВНА БЮДЖЕТНА ИНСТИТУЦИЯ ЗА ЗДРАВЕОПАЗВАНЕ. "

"МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ федерална държава Образователна институция за висше професионално образование Тюмен държавен университет Институт по биология, Катедра по ботаника, биотехнологии и ландшафтната архитектура SP АРФЕЙВ ДАНЪК Образователен и методичен комплекс. Работната програма за студентите от направление 35.03.10 ландшафтна архитектура на пълно работно време профил на обучение декоративни растения и детска Тюмен държавен университет. "

Държавен университет на Далечния Изток Исаев СИНЕРГЕТИКА биология Уводна Учебник Владивосток книга е съставена въз основа на курс от лекции за студенти по клетъчна биология на Държавния департамент на Университета Далечния изток, чете от автора в продължение на няколко години, и е пригодена за биолози, опростена и илюстрирани основните идеи на нелинейни науката (често наричани synergetics), включително теорията на бифуркациите и. "

"Общински общообразователни институции бюджетни" Средна общообразователно училище №18 "се разглеждат на заседание на" Договорена "," Одобрено "SHMO природни науки заместник-директор, директор MBOU« Училище №18 »Head TI Антонович на UVR LA Ishutina V.N. Никитин протокол №1 на "23" май 2014 ПРОГРАМА учебни предмети биология клас 9 декември (ГЕФ) Обяснителна Abakan Забележка Тази биология програма се основава на федералната провинция Образователен стандарт. "


Статии Хепатит