HCV кръвен тест: какво е това?

Share Tweet Pin it

Според понятията за съвременна медицина разпространението на разпространението в земното кълбо принадлежи на вируси. Човечеството трябвало да използва много сили и ресурси, за да се бори с тях. Изключително важна роля има при диагностицирането на вирусно увреждане на черния дроб, по-специално вирусния хепатит С. Правилното декодиране на лабораторните показатели за откриване на това заболяване е трудно поради големия брой фалшиво положителни резултати от кръвни тестове. Ето защо правилният избор и интерпретация на изследването са толкова важни.

Методи за откриване на вирус

Хепатит С вирус (hcv) е малка РНК верига във вирусната обвивка, която използва генетичен материал на чернодробните клетки за нейното възпроизвеждане. Техният директен контакт води до:

  • Началото на възпалителния процес в черния дроб;
  • Унищожаване на чернодробни клетки (цитолиза);
  • Стартирането на имунни механизми със синтеза на специфични антитела;
  • Автоимунна агресия на имунните комплекси срещу възпалени хепатоцити.

Хепатит С вирус, който се вкарва в тялото, причинява много бавен имунен отговор, който го оставя неоткрит за дълго време. Болестта често се среща само в стадия на чернодробна цироза, въпреки че през цялото време вирусните частици и съответните им антитела циркулират в кръвта. Това е основата за всички известни методи за диагностициране на HCV инфекция. Те включват:

  1. Серологични тестове в лабораторни условия;
  2. PCR-диагностика (полимеразна верижна реакция);
  3. Експресни тестове за определяне на болестта у дома.

Видео за хепатит C:

Възможни индикации за изследването

Всеки може да отиде да тества за инфекция с HCV. Специално свидетелство за това не е необходимо, с изключение на желанието на човек да се подложи на този кръвен тест. Но има категория лица, които задължително трябва да бъдат разследвани. Те включват:

  • Кръвни донори;
  • Хората, които са получили кръвопреливане, неговите компоненти или препарати на базата на него;
  • Повишаване нивото на чернодробните трансаминази (ALT, ASAT), особено след предишни хирургични интервенции, труд и други медицински манипулации;
  • Подозрение за вирусен хепатит С или необходимостта да се изключи тази диагноза;
  • Отрицателни тестове за вирусен хепатит В при наличие на симптоми на чернодробно възпаление;
  • Контролирайте ефективността на лечението с HCV инфекция и адресирайте въпроси, свързани с тактиката на по-нататъшното лечение.

Характеристики на серологичната диагностика и оценка на резултатите

Лабораторен анализ на кръв за HCV включва откриване на антитела (имуноглобулин) класове М и G антигенен компонент на хепатит С вирус се използват за тази реакция главно свързан имуносорбентен анализ (ELISA) и радиоимуноанализ (RIA). Лабораторните методи за откриване на антитела се считат за най-надеждни, тъй като позволяват използването на няколко антигенни комплекси от най-често срещаните видове вирус на хепатит С като реагенти.

За проучването се събират около 20 милилитра венозна кръв от периферната вена. Той се центрофугира и се утаява, за да се получи плазма (течна прозрачна част). Елементите на формата и утайката се отстраняват. За да избегнете фалшиви положителни резултати, е по-добре да вземате кръвта сутрин преди хранене. Преди няколко дни е желателно да се изключи употребата на лекарства, особено засягащи състоянието на имунната система.

Резултатите от анализите могат да бъдат представени по следния начин:

  1. Hcv - отрицателен. Това означава, че не са открити антитела срещу вируса на хепатит С в тялото. Няма болести;
  2. Hcv - положителен. Това показва наличието на антитела срещу вируса на хепатит С в тестваните кръвни проби. Лицето има или това заболяване, или в момента е болно или има хронична форма;
  3. Анти-hcv IgG беше открит. В този случай си струва да се мисли за хроничен вирусен хепатит С;
  4. Анти-hcv IgM беше открит. Неговото изолирано присъствие говори за остър процес и комбинация с анти-hcv IgG - екзацербация на хронични.

Характеристики на бързото тестване

Всеки може да направи кръвен тест само с hcv. Това стана възможно благодарение на създаването на специални тестови системи за бързо диагностициране на вирусния хепатит С. Тяхната ефективност е по-ниска от лабораторните серологични методи, но е отлична за приблизително определение на възможната инфекция в кратко време.

Можете да си купите или поръчате тестова система във всяка аптека. Той включва всичко необходимо за теста. Анализът започва с отварянето на стерилния контейнер и приготвянето на всички компоненти. След лечение със специална салфетка с антисептичен пръст, тя леко се пробива със скрепител. С помощта на пипета се събират 1-2 капки кръв и се прехвърлят на вдлъбнатината върху плочата за изпитване. Към кръвта се добавят 1-2 капки реагент от флакона, който е част от теста. Резултатът трябва да бъде оценен след 10 минути. Изключително важно е да не се оценява резултатът след 20 минути поради възможността за фалшив положителен резултат.

Извършеният кръвен тест може да се разглежда както следва:

  1. В прозореца на таблетката се появи една лилава лента (тестът е отрицателен). Това означава, че не се откриват антитела срещу hcv в тестваната кръв. Лицето е здраво;
  2. В прозореца на таблетката се появиха две лилави ленти (тестът е положителен). Това показва наличието на антитела в изследваната кръв и връзката на организма с вирусния хепатит С. Такива хора са обект на по-задълбочени методи на серологична диагностика без неуспех;
  3. В прозореца на таблета не се появи нито една лента. Тестовата система е повредена. Препоръчваме да тестваме повторно.

Характеристики на PCR диагностиката

Полимеразната верижна реакция е най-модерният начин за откриване на генетичния материал на всяка клетка. По отношение на вирусния хепатит С, методът позволява да се открият РНК молекули на вирусни частици. Това може да се направи качествено и количествено. Първият метод може да не е информативен, ако броят на вирусните частици в изследваната кръв не достигне праговата стойност. Вторият метод ви позволява точно да посочите броя на откритите РНК вирусни вериги и е по-чувствителен.

Анализът може да бъде представен чрез следните резултати:

  1. НСV РНК не беше открита. Това означава, че в тестовата кръв няма вирусни частици;
  2. РНК hcv се открива. Това показва инфекцията с хепатит С;
  3. Извършва се количествен тест за hcv-PCR, за да се оцени степента на инфекция на кръвта на пациента и активността на вирусното умножение в организма. Препоръчва се високо кръвно вирусно натоварване от 600 до 700 IU / ml. Индикатори над тази цифра се наричат ​​много високи, под тях - нисък вирусен товар на кръвта.

Кръв тест за hcv при диагностицирането на вирусен хепатит С е единственият информативен, достъпен и безвреден метод за потвърждаване на диагнозата. Правилното тълкуване и комбинирането на различни начини за това намаляват броя на диагностичните грешки.

Най-добър анти-HCV (комплект 2) 12x8

Cat. № 0772

цена: при поискване

Можете да добавите елемента в количката, като посочите количеството

Тип опаковка: картонена кутия

Комплект от реагенти за идентифициране immunoenzyme класове имуноглобулини G и М на вируса на хепатит С в серум / плазма на човешка кръв и кръвни продукти (имуноглобулини, интерферони, криопреципитат, албумин). Пакет 2 е предназначен да държи 96 определения, включително контрол - 4 ямки за всеки анализ, както и използването на частични един ленти на изследването. Той е предназначен за ръчно настройване в автоматични ELISA анализатори от отворен тип. Техниката се основава на ELISA в твърда фаза, като се използват рекомбинантни антигени. Възможно е да се изчисли коефициентът на позитивност. Обемно равно третиране и проби. Стандартизация условия на ензимната реакция с хромогена в термостат при 37 ° С Продължителност на реакцията: 1 час и 20 минути

Функционална цел

Препоръчва се за изследване на донори на кръв, органи, човешки тъкани, диференциална диагностика на вирусен хепатит

Технически спецификации

Съдържание на комплекта:
1. Сгъваема таблетка - 1 бр.
2. Положителни и отрицателни контроли - 2x1 fl.
3. Конюгат и разтвор за разреждане (РК) - 2x1 fl.
4. Разтвор за разреждане в серум (PC) - 1 ет.
5. Фосфатно-буфериран физиологичен разтвор, концентрат (PBS) - 2 fl.
6. Субстратен буферен разтвор (SBR) - 1 ет.
7. Тетраметилбензидин, концентрат (ТМВ) - 1 ет.
8. Спрете реагента - 1 ет.
9. Инструкции за употреба.
10. Филм за запечатване.
Тестова проба: серумна или кръвна плазма с обем не повече от 40 μl.
Брой протоколи за извършване на ELISA: най - малко 4.
Условия на съхранение: при температура +2. 8 ° C за целия срок на годност, указан на етикета.
Срокът на годност на комплекта е 12 месеца от датата на производство.
Регистрирани с Roszdravnadzor

Кръвен тест за HCV

Начините за разпространение на болестта могат да бъдат разделени на групи:

  • Парентерално - което означава, че инфекцията възниква чрез споделяне на медицински инструменти, игли и нестерилно маникюрно устройство;
  • Сексуални - един вирус се предава от един партньор на друг по време на незащитен сексуален контакт;
  • Вертикалният път е инфекцията на плода от болна майка.

Анализът на хепатита трябва да се предава от хора, които:

  • Подгответе се за планирана хоспитализация;
  • Те планират да имат бебе;
  • Увеличаването на билирубина, ALT или AST е установено в клиничния анализ;
  • Имате симптоматична картина, подобна на признаците на хепатит С;
  • Те често променят сексуалните си партньори или предпочитат незащитен секс;
  • Пристрастени към наркотиците;
  • Те щяха да бъдат донори;
  • Работниците в медицинските или предучилищните институции трябва да бъдат подложени на ежегодно цялостно проучване, включително и този вид анализ.

HCV кръвният тест е лабораторен метод за диагностициране на хепатит С, механизмът на неговото действие се основава на идентифицирането на антитела като IgG и IgM, които започват да се произвеждат активно, когато антителата на вируса се появяват в кръвта. Какво е това? Това са патогенни микроорганизми, които се появяват няколко седмици или дори месеци след инфекцията.

Обяснение на анализа

Изследвайки структурата на HCV, учените стигнаха до извода, че причинителят е геном, свързан както с животните, така и с растителните вируси. Състои се от един ген, в който може да се постави информация за девет протеини. Първата задача е да проникнат вируса в клетката, а втората са отговорни за образуването на вирусните частици, докато други в този момент превключват естествените функции на клетката към себе си. Те принадлежат към структурната група протеини, когато другите шест са неструктурни.

Геномът на HCV е единична РНК верига, затворена в собствена капсула (капсид), образувана от нуклеокапсиден протеин. Всичко това е обвито от обвивка, състояща се от протеини и липиди, позволява успешно свързване на вируса със здрава клетка.

След като вирусът навлезе в кръвообращението, той започва да циркулира през тялото през кръвта. Веднъж в черния дроб, геномът активира функциите си и се присъединява към чернодробните клетки, постепенно ги прониква. Хепатоцитите (т.нар. Тези клетки) се подлагат на смущения по време на тяхното функциониране. Основната им задача е "да работят за вируса", по време на която те трябва да синтезират вирусни протеини и рибонуклеинова киселина.

HCV различава няколко генотипа, т.е. щамове. Понастоящем има 6 генотипа, докато всеки вид има свой собствен подвид. Всички от тях са определени в съответствие с номерацията от 1 до 6. Има информация за локализирането на вирус от него в рамките на земното кълбо. Така например, 1, 2 и 3 генотип е намерена в целия свят, а 4 - в по-голяма степен в Близкия изток и Африка, 5 - в Южна Африка, и 6 - в Югоизточна Азия.

Основата за назначаването на лечението трябва да бъде положителен резултат от кръвен тест за HCV, както и специфичен генотип.

Декодиране на HCV анализ:

  • Анти-HCV IgM е маркер за активна репликация на вируса на хепатит С;
  • Анти-HCV Ig G е вероятното наличие на вируса на хепатит С;
  • Ag HCV - положителен резултат, показващ наличието на вируса на хепатит С;
  • HCV РНК - Хепатит С вирус присъства в тялото и активно напредва.

Фалшив положителен резултат

По-рядко е да се говори за фалшиво-негативни резултати, които се регистрират при пациенти, приемащи имуносупресори, или това се влияе от характеристиките на тяхната имунна система. Същият резултат се очаква, ако хепатит С е в ранен стадий на развитие.

В случай на неразбиране можете да прибягвате до PCR тест за хепатит С, ако дава положителен резултат, а след това да направите друг анализ за определяне на вирусния генотип.

Срок и как да се предприемат

Анализът на хепатит С предполага кръвна проба от пациента на празен стомах, тъй като той трябва да има вечеря не по-късно от 8 часа преди доставката на материала. След като се събудите, можете да пиете само малко обикновена вода. По-добре е в навечерието на проучването да следвате диетата си и да я направите възможно най-лесно и лесно. Пържените и мазни храни трябва да бъдат напълно изключени, както и алкохолът. Тежката физическа работа и спортът могат да повлияят на надеждността на резултатите от теста, затова се опитайте да го избегнете.

Ако желаете да се направи кръвен тест за откриване на хепатит С, а след това, което трябва да се каже, че наркотиците могат да нарушат реалната стойност, така да се провеждат изследвания или да започнете да приемате лекарства, или имат няколко седмици след тяхното оттегляне. Ако спрете лечението с наркотици е невъзможно от свидетелството на лекаря, тогава уведомете медицинската сестра, която прави анализа. Тя трябва да отбележи името на лекарството и дозата, в която сте се предписали.

Лабораторният тест изисква серум. Колко са валидни материалите? Те могат да се съхраняват за по-малко от пет дни при температурен диапазон от 2 до 8 градуса по Целзий и повече от пет дни при условие, че температурата на съхранение е -20 градуса по Целзий.

Кръвните тестове за HCV са задължителни за хора с имунодефицитни състояния, особено HIV.

Администрацията на портала категорично не препоръчва самолечение и съветва да се консултира с лекар при първите симптоми на заболяването. На нашия портал можете да намерите най-добрите лекари-специалисти, на които можете да се регистрирате онлайн или по телефона. Можете сами да изберете правилния лекар или ще го вземем абсолютно за вас безплатно. Също така, само когато записвате през нас, цената на консултацията ще бъде по-ниска, отколкото в самата клиника. Това е нашият малък подарък за нашите посетители. Бъдете здрави!

Най-добър анти-VSS

Комплект от реагенти за имуно-ензимно откриване на имуноглобулини от клас М към вируса на хепатит С.

Най-добър анти-HCV автомобил (комплект 1)
(За автоматичните анализатори)

Най-добър анти-HCV автомобил (комплект 2 / Charoite)

Комплект от реагенти за имуносупресорно откриване на имуноглобулинови класове G и M на вируса на хепатит С за автоматични ELISA анализатори.

Най-добър анти-HCV (комплект 1)

Най-добър анти-HCV (комплект 2)

Най-добър анти-HCV (комплект 3)

Най-добър анти-HCV (комплект 4)

Комплект от реагенти за имуносупресорно откриване на имуноглобулини от класове G и M на вируса на хепатит С.

Комплект от реагенти за имуносупресорно откриване на имуноглобулини от класове G и М на отделни протеини на вируса на хепатит С (ядро, NS3, NS4, NS5).

Най-добър анти-HCV-потвърдителен тест

Комплект от реагенти за имуно-ензимното потвърждаване на наличието на имуноглобулини от класове G и M за вируса на хепатит С.

HCV AG / АТ-IFA-BEST (комплект 1)

HCV AG / АТ-IFA-BEST (комплект 2)

Комплект от реагенти за откриване на имунни ензими на антитела срещу вируса на хепатит С и основния антиген на HCV.

Комплект от реагенти за имунно-ензимното откриване на сърцевинния антиген на вируса на хепатит С.

Комплект от реагенти за потвърждаване наличието на антитела срещу вируса на хепатит С по метода на имунното блотиране.

Комплект за вътрешно-лабораторен контрол на качеството ELISA "Серум, съдържащ антитела срещу вируса на хепатит С".

Серумен контролен панел против HCV

Комплект от серумни проби, съдържащи и несъдържащи антитела срещу вируса на хепатит С. За интралабораторен контрол на качеството (валидиране) на изследвания за анти-HCV.

Стандартен серумен панел против HCV

Комплект от серумни проби, съдържащи и несъдържащи антитела срещу вируса на хепатит С.

Anti-vgs положителни какво означава това

Антитела срещу хепатит С и какво трябва да знаете за тях

Когато в тялото навлизат различни чужди частици, като вирусите, човешката имунна система започва да произвежда такива вещества, наречени имуноглобулини. Това са специални клетки, които помагат на тялото да започне да се бори с вируса. Те се наричат ​​антитела срещу хепатит С. Какво трябва да знам за тях?

Какви са антителата срещу хепатит С?

Такива антитела се откриват чрез специален метод на ELISA анализ или чрез скрининг, който се използва за определяне дали човек има вирус на хепатит С. Такива антитела срещу хепатит С са от 2 класа:

- така че тези антитела срещу хепатит С се наричат ​​на латински. В същото време, сумата от тези антитела са антитела срещу хепатит С.

Какво означава наличието на антитела срещу хепатит С?

Абсолютно всички пациенти са изследвани за наличието на такива маркери да се определи дали те имат хепатит С. Ако заболяването вече се осъществява в остро или хронично, след това те имат антитела Анти-HCV, тези антитела за хепатит С могат да бъдат открити само след 4 или 6 седмици от началото на заболяването.

Има случаи, при които, в присъствието на антитела, анти-HCV общо, хората се възстановяват без помощта на специалисти и независимо. Тези хора могат да намерят този пазар дори и в течение на 4 до 8 години след тяхното възстановяване. Дори ако тестът против HCV е положителен, това все още не е достатъчно, за да се установи правилно диагнозата. При хроничен хепатит такива антитела срещу хепатит С са разпределени постоянно и след положителния резултат от лечението може да се задържат в тялото за дълго време, но техните заглавия като постепенно започват да намаляват.

Антитела срещу хепатит С и какво трябва да знаете за тях?

Най-важното е, че трябва да знаете, че такива антитела не могат да защитят срещу развитието на самата инфекция и също така не могат да осигурят имунитет срещу повторна инфекция.

Все още има такова нещо като спектъра на анти-HCV. Това са и антитела, освен това са специфични, те са подходящи за индивидуални структурни и неструктурни протеини на този вирус. Тяхното дефиниране е важно, за да се оцени колко високо е вирусното натоварване, активността на инфекцията, риска от хронична инфекция и също така да се разграничи остър или хроничен хепатит и колко вече е засегнат черният дроб.

Антитела срещу хепатит с от класа на IgM се отнасят до антигените на този вирус. Те могат да се определят още след 6, а в някои случаи и 4 седмици непосредствено след инфекцията, в който случай тяхната концентрация може да достигне максимум. И след завършването на този процес нивото на IgM ще започне да пада, но когато инфекцията се активира отново, нивото ще се повиши отново. Следователно се смята, че такива антитела са пряк признак на хронична или остра инфекция със знак за реактивация.

HCV - кръвен тест - какво е това?

Едно от най-сложните и широко разпространени болести в края на миналия век е инфекцията с вируса на хепатит C. В развитите страни разпространението на болестта е 2%, докато общият брой на пациентите по света е 500 милиона души. Инфекцията е открита много по-късно от предшествениците си: хепатит А и В - и първоначално се нарича "нито инфекция А, нито В". Заедно с нарастването на наркоманиите броят на заразените хора расте всяка година. Причината за всичко е начинът на инфекция: с интравенозно инжектиране на лекарството.

Също така, вирусът се предава по време на раждане от майка на дете, ако е имало увреждане на кожата. Така че е толкова важно да знаете, HCV кръвен тест - какво е това? При бременност е необходимо да се премине към всяка бъдеща майка. Това заболяване е лидер сред причините, които изискват трансплантация на пациент с чернодробно заболяване.

Как се развива хепатит С?

Инфекцията с вируса на хепатит С възниква, както следва: кръвта на болно лице трябва да попадне в кръвта на здрав човек. Първият кръвен поток отвежда частиците на вируса, разтворени в здрава кръв, в черния дроб и след това възпроизвеждането започва. В този случай, човешкия черен дроб страда двойно: от една страна, чернодробните клетки са повредени активността на вируса, а от друга - на човешкото тяло започва да се бори: го изпраща на имунния отговор, а именно специални-лимфоцитите са клетките, които ще бъдат призовани да унищожи заразените чернодробни клетки.

Признава имунната система на вируса от съдържанието на чужд генетичен материал. Всеки, който е преживял това, както и някои задължителни пациенти, знаят какво означава HCV кръвен тест. Това, че те са много важни показатели както на етапа на откриване, така и на етапа на лечение, всеки ще каже, макар че един ден се изправи пред този проблем.

Кога е HCV анализът?

Когато пациентът има оплакване за черния дроб, лекарите обикновено предписват кръвен тест за такъв пациент с HBS и HCV. За да се определи дали заболяването е причинено от наличието в кръвта на вируса на хепатит С или други съпътстващи заболявания, е необходим кръвен тест за HCV. Какъв е този показател?

Анализът разкрива антитела в човешката кръв, които могат да принадлежат към един от 2 класа:

  • Антитела срещу HCV. Те са основният маркер. Наличието на инфекция в тялото се потвърждава, когато се открие HCV РНК. Тези антитела се намират на етапа на възстановяване и могат да продължат да бъдат в кръвта още 1-4 години. Основният индикатор за наличието на хроничен хепатит е нарастващата честота на анти-HCV.
  • Нивото на IgA, IgM, IgG в кръвния серум. Увеличаването на показателите на тези маркери предполага увреждане на черния дроб при излагане на алкохол, с цирзова билярда и някои други заболявания.

За какво говорят маркерите?

От момента на получаване на антигена в човешкото тяло, HCV кръвен тест може да бъде открит още на 4-5 седмица. Че вирусът на хепатит С не може да бъде точно казано. Тези данни са необходими, за да може лекарят да вземе решение относно необходимостта такъв пациент да предприеме антивирусна терапия. Особено, ако в кръвта има по-малко от 750 РНК копия за 1 ml кръв, това показва минимална вирусна атака.

Антителата на хепатит C винаги се отнасят до един от двата класа - G или M, чиито данни задължително трябва да бъдат въведени в HCV кръвния тест. Обяснението обяснява тези параметри като имуноглобулинови клас G (IgG) и М (IgM). Положителният резултат на първия маркер все още не показва специфична диагноза. Класът имуноглобулин G достига максималните стойности за 5-6 месеца от момента на инфекцията в организма и остава същият при хроничен хепатит.

Класът имуноглобулини М може да се определи още 1-1.5 месеца след инфекцията и много бързо да достигне максималната концентрация. Има още един индикатор - анти-NS3, който с високите си показатели е недвусмислен предвестник за наличието на остър процес в организма.

Как да дарим кръв за HCV анализ?

За да дарите кръв в лабораторията, за да се определи наличието на HCV антитела, няма конкретни инструкции. Единствената препоръка на лекарите: оградата трябва да се извършва на празен стомах. Кръвта се взема от вената на тествания пациент с спринцовка за еднократна употреба.

Декодиране на индикаторите

Така че предполагаемият пациент е направил HCV кръвен тест. Какви са тези плюсове и минуси в резултата? Следната таблица ще отговори на това.

Видове тестове с HCV

Има качествени и количествени тестове, които определят HCV (кръвен тест). Какво е това?

Количествените тестове се прилагат, ако долната граница достигне 500 копия на РНК на ml или 200 единици на ml. Определете тези тестове за HCV-РНК. Измерванията се извършват два пъти, тъй като данните често са различни. С положителни анти-HCV и количествени тестове дава положителен резултат при около 75% от случаите. Освен това, като резултат може да се получи в почти 95% от пациенти с остър или хроничен хепатит С. Тези тестове, използвани при диагностицирането на остри инфекции, както и в имунодефицитни пациенти с антитяло тест даде отрицателен резултат, обаче, има съмнение за присъствие на HCV инфекция.

Качествените тестове са по-чувствителни, долната граница е 100 РНК копия на 1 ml. Използва се за установяване на диагнозата на остра HCV инфекция чрез извършване на кръвен тест за HCV. Положителен резултат може да бъде открит още през първите две седмици след инфекцията. Качественият тест е различен, тъй като може да даде и фалшив положителен или фалшиво-отрицателен резултат.

Кръвен тест за HCV: какво означава това и кога е предписано?

Анализ на кръв за HCV - един от методите за диагностициране на хепатит С вирус Тестът се определя, когато симптомите на хепатит С, повишени чернодробни ензими, както и изследвания на хора с риск за инфекция с вирусен хепатит. В последния случай, във връзка с кръвен тест за HCV извършва кръвен тест HBs Ag.

HCV (вирус на хепатит С вируса на хепатит С) принадлежи към семейството на флавивируси. За първи път е открита през 1988 г. от група изследователи от американската биотехнологична компания Хирон. Геномът на HCV е представен от молекула на РНК, така че скоростта на мутация на вируса е много висока. На хората, заразени с вируса на хепатит С, се откриват вирусни частици, чиито геноми се различават с 1-2%. Тази особеност на популацията на вируса й позволява успешно да се възпроизвежда, независимо от защитните реакции на човешкия имунитет. Разликите в генома на вируса могат да повлияят на хода на инфекцията и резултатите от лечението.

Според Световната здравна организация досега вирусът на HCV е заразил около 150 милиона души, всяка година хепатит С вирус причинява смъртта на повече от 350 000 пациенти.

Методи за предаване на хепатит С

Вирусът на хепатит С се предава от заразена кръв, като получателят на донор на кръв или органи от заразено майката на детето, чрез сексуален контакт, като се използват нестерилни спринцовки в настройките и инструменти за здравеопазване за татуировка и пиърсинг салони.

Болестта може да се появи в остра форма, продължаваща няколко седмици и в хронична форма, което може да доведе до рак или цироза на черния дроб.

HCV-анализ на кръвта: какво означава това от гледна точка на имунологията?

Кръвният тест за HCV се основава на откриването на специфични IgG и IgM имуноглобулини, така че този вид изследване понякога се нарича анти-HCV кръвен тест. Имуноглобулините са специфични протеини на имунната система, произвеждани от В-лимфоцити в отговор на откриването на чужди протеини в организма. Когато се инфектират с вируса на хепатит С, имуноглобулините се произвеждат, за да покрият протеините на вируса, ядрото на нуклеокапсид и неструктурираните NS протеини. Появата на първите антитела към вируса се извършва не по-рано от 1-3 месеца след инфекцията. Съгласно откритите антитела, лекарят може да определи фазата на инфекцията (остра, латентна или реактивираща). Специфични антитела срещу хепатит С могат да бъдат открити дори след 10 години след заболяването, но тяхната концентрация е ниска и не са в състояние да се предпазят от повторна инфекция с вируса.

Тълкуване на резултатите от анализа

  • Положителен кръвен тест за HCV. Какво означава това? Този резултат показва наличието на заболяване на хепатит С в остра или хронична форма или по-рано прехвърлено заболяване.
  • Негативен HCV анализ на кръвта. Какво означава това? В кръвта, няма вирус на хепатит С или инфекция са възникнали наскоро, така че антитела към него все още. При някои пациенти антителата срещу този вирус изобщо не се произвеждат. Този сценарий се нарича серонегативни заболяване, това се случи в 5% от случаите.
  • PCR върху HCV РНК не показа вирус, преди това беше получен положителен HCV кръвен тест. Какво означава това? Резултатът от кръвния тест за HCV е фалшиво положителен, като причината за това може да са някои инфекции, неоплазми, автоимунни заболявания.

Открито в кръвта HBV антитела, какво означава това?

Наталка

Антителата на вируса на хепатит С (анти-HCV) - инфекция с хепатит С диагностичен метод за откриване на кръв през двата класа IgG антитела и IgM (общо специфични антитела, произведени с протеините на вируса на хепатит С чрез ELISA-свързан имуносорбентен анализ). В нормата няма антитела срещу вируса на хепатит С в кръвта.
Откриването на общо антитела (анти-HCV) позволява диагностицирането на хепатит С от 3-6 седмици и повече след инфекцията. Обаче откриването на антитела чрез ELISA е скрининг и не е достатъчно за диагностициране на вируса на хепатит С и изисква потвърждаване чрез метода на имуноблот.

Джулия

За разлика от HBV, при диагнозата на които се вземат под внимание антигенните и антителни маркери, само антитела се хващат с HCV чрез ELISA. HCV антигените, ако влязат в кръвта, са в количества, които практически не се улавят. HCV антигените могат да бъдат открити в чернодробни биопсии, като се използват имунохистохимични методи за изследване. Това значително ограничава способността за оценка на хода и дейността на инфекциозния процес.
Напоследък има индикации за нов подход към индикацията на HCV антигени в кръвта. Първата стъпка е освобождаването на антигени от клетъчните структури чрез серумен лизис, вторият е улавянето на антигени със специфични моноклонални антитела. Въвеждането на този метод в клиничната практика има за цел значително да обогати възможностите за диагностициране и контрол на протичането на HCV.
Анти-HCV по-голямата част (с изключение на антителата от клас М до coreAg) не показва постоянно вирусната репликация, не характеризират неговата активност може да съответства на пост-инфекция. Трябва да имаме предвид също така, че получателите, които са били прелети заразена кръв, могат да бъдат открити анти-HCV донор с едно указание, не е непременно показателни за следтрансфузионно инфекция с HCV. Указание за необходимостта от анти-HCV е главно решава проблема на етиологичната диагноза, но не характеризира хода на инфекция (остра, хронична) и не решава проблема на прогнозиране. Пациенти с хронична HCV анти-HCV открити в кръвта не само в свободна форма, но и в състава на циркулиращи имунни комплекси. Съдържанието им е сравнително по-голямо с развитието на смесен хепатит с HBV / HCV.
Антитела се формират към всеки от вирусните протеини, намиращи се в структурния и неструктурния регион на HCV. Това определя неравномерната им специфичност и, съответно, различната диагностична информативна стойност на показанието. За скрининг на анти-HCV се използва методът ELISA и като потвърждаващ референтен тест се използва методът на имуноблот (RIBA). Първата система за тестване, базирана на индикацията за антитела срещу C-100-3 в ELISA, бързо се разпространи в клиничната епидемиологична практика при подбора на донорите. Въпреки това, тя позволява да се улавят антитела в зоната, която характеризира само 12% от вирусния полипротеин и изключително в неструктурния регион (NS3, NS4). В допълнение, изкуственият рекомбинантен С-100-3 антиген не съвпада напълно с естествените вирусни протеини, което предопределя слабата му имуногенност.
Антителата към С-протеина (ядро Ag) с помощта на С-100-3 антиген не се откриват изобщо. Всичко това предопределя ниската специфичност на индикацията за анти-HCV и голям брой фалшивоотрицателни резултати, особено във фазата на хронична HCV. При пациенти с тежка хипергамаглобулинемия, напротив, тестът С-100-3 често дава фалшиви положителни резултати. Когато се посочва антитяло на С-100-3-специално възникнат затруднения при решаване на проблема с диференциална диагноза на хроничен хепатит С с автоимунен хепатит, криоглобулинемия, колагеноза.
Тестовите системи от второ поколение позволяват да се улавят антитела към протеини в различни зони на генома, не само неструктурен, но и структурен. Предимството им е преди всичко висока специфичност, както и възможността за по-пълно представяне на антигенния спектър на HCV. Използването на тестови системи от второ поколение позволи значително да подобри селекцията на донорите и да намали заплахата от развитие на посттрансфузивен HCV.
В същото време и с използването на тестови системи от второ поколение са възможни фалшиво-отрицателни резултати, особено при пациенти с HCV генотипове, необичайни за този регион. Най-модерните системи за тестване са третото поколение.
Информативността на изследванията значително се увеличава, когато широкият спектър от анти-HCV е изчерпателно оценен, задължително при условия на динамичен контрол. Такава система за наблюдение позволява да се открият промени в съотношението на антителата към различните HCV антигени.

Евгени Стефансов

На сина се разкрива АТ k HCVAg. И HB s Ag не се открива, може ли да е грешка. И какво е необходимо да предадете анализа за точната диагноза? Синът ми не използва наркотици в продължение на 27 години. Кръвта е дадена два пъти в Тамбов за ХИВ и в реката. и т.н. Inzhavino на медицинския съвет в армията и след това поставя такава диагноза.

Хепатит Анти HCV-общо (polozhitelny) Дайте съвет, моля!

Съпругата ми и аз се подложихме на тест, тестовете показаха хепатитен вирус. Имам общо анти-HCV положителни. Останалите са отрицателни. На съпругата също. Колко опасно е колко време се третира? Колко струва? И какво ще кажете за работа, възможно ли е да работите по време на лечението? Чувствам се страхотно!

R до

Анти-HCV присъства както в острата (те могат да бъдат открити още от 4 до 6 седмици след инфекцията), така и при хроничен хепатит. Общо анти-HCV се среща и при тези, които са имали хепатит С и се възстановяват самостоятелно. При такива хора този маркер може да бъде открит в рамките на 4 до 8 години или повече след възстановяване. Поради това, положителният анализ за анти-HCV не е достатъчен за установяване на диагноза. На фона на хронична инфекция общо антитела се откриват непрекъснато, и след успешно лечение се съхранява дълго време (главно поради анти-HCV ядро ​​IgG, написани за тях по-долу), както и техните заглавия постепенно намаляват.

Екатерина Густова

Хепатит С се предава с кръвни и биологични течности, парентерални, сексуални и трансплацентарни пътища. група с повишена опасност се състои от хора, които имат формата на интравенозна наркоманията, промискуитет, както и здравни специалисти, пациенти на хемодиализа или преливане на кръв, сключени. Прониквайки в тялото, HCV навлиза в кръвта макрофагите и хепатоцитите на черния дроб, където се репликира. Чернодробно увреждане настъпва дължи основно на имунната вирус лиза също има пряко цитопатичен ефект. Сходство вирусен антиген с антигени на система човешки хистосъвместимост поражда автоимунно ( "система") реакции. Програмата HCV-инфекция може да възникне прояви на системно автоимунно тиреоидит, синдром на Сьогрен, идиопатична тромбоцитопенична пурпура, гломерулонефрит, ревматоиден артрит и други. В сравнение с други вирусен хепатит, хепатит С има по-светъл клинична картина често става хронична. При 20 - 50% от случаите на хронични резултати хепатит С в развитието на чернодробна цироза и 1,25 - 2,50% - на развитието на хепатоцелуларен карцином. При висока честота има автоимунни усложнения.
Искам да те разстроя! Хепатит С не е лечим, както и ХИВ инфекция! Можете да живеете с него от години! Често цирозата на черния дроб може да се появи рано или късно. Гледайте с кого работите. Не е известно дали диагнозата ви ще повлияе на работата. Но е по-добре колегите ви да не казват тази диагноза

Костарев константин

Заслужава да се отбележи, че едва около 20% от хората, които са били заразени с хепатит С, са в състояние сами да се справят с инфекцията. Затова, за съжаление, в повечето случаи наличието на антитела срещу HCV показва хроничен вирусен хепатит С (CVHC).

Олга

На всичко отгоре добавям, че след откриването на антитела е необходимо да се направи анализ за наличието на вируса в кръвта. Този анализ се нарича HCV РНК чрез PCR метод, ако е положителен, то е необходимо да се направи генотип, т. Е за идентифициране на генотипа на вируса (по това време и цената на лечението зависи). Ако сте отрицателни, може би сте се превърнали в един от 15-20% от щастливите, които са се самоочиствали. Но в този случай трябва да наблюдавате ситуацията и поне веднъж годишно трябва да направите PCR анализа.
Ако все още има хепатит, тогава не трябва да се разстройвате. Той се лекува успешно. Лечението е трудно, но можете да работите, ако работата не е сред опасните, изискващи специална концентрация. В космоса не си струва да летиш)))

Комплект от реагенти за имуносупресорно откриване на имуноглобулини от клас G и М на отделни протеини на вируса на хепатит С (ядро, NS3, NS4, NS5) (Най-добър анти-HCV спектър)

Условия на съхранение Комплект от реагенти за имуносупресорно откриване на клас G и М имуноглобулини за отделни протеини на вируса на хепатит С (ядро, NS3, NS4, NS5) (Най-добър анти-HCV спектър)

Да се ​​пази от деца.

Поръчайте медицински продукти в аптеките:

Оставете своя коментар

  • Комплект за първа помощ
  • Онлайн магазин
  • За нас
  • Свържете се с нас
  • Контакти на издателството:
  • +7 (495) 258-97-03
  • +7 (495) 258-97-06
  • Електронна поща: [email protected]
  • Адрес: Русия, 123007, Москва, ул. 5 Магистрална, 12.

Ние сме в социалните мрежи:

© 2000-2018. РЕГИСТЪР НА ЛЕКАРСТВАТА НА РУСИЯ ® RLS ®

Всички права запазени.

Търговската употреба на материали не е разрешена

Информацията е за здравните специалисти

Лабораторна диагностика на хепатит С

MI Михайлов, Институт по епидемиология и микробиология. NF Gamalei RAMS, Москва

Когато се посочва диагнозата "хепатит С", трябва да се имат предвид следните най-важни фактори:

  • индикатори на активността на "чернодробните" ензими;
  • наличие или отсъствие на маркери за инфекция с вирус на хепатит С (HCV) и други хепатотропни вируси;
  • епидемиологична история;
  • резултатите от клиничното изследване на пациента. Само подробно описание на тези фактори прави възможно диагностицирането на тази болест с висока степен на надеждност. Лаборатория работник трябва да предостави обективна информация за определяне на границите на вирусни антигени и антитела, както и HCV РНК, което позволява на лекаря, служител на кръвопреливане услуги кръвни и епидемиолози да реши предизвикателствата пред които са изправени. Най-често това е:
  • Идентифициране на лица с HCV за намаляване на посттрансфузионния хепатит C;
  • диагностиката и диференциацията на остър и хроничен хепатит С;
  • прогноза на заболяването;
  • назначаване, оценка и прогнозиране на ефективността на терапията;
  • проучване на географската ширина на HCV в популацията и различните групи от населението.
    В същото време основните области на работа на лабораторния персонал са:
  • разработване и избор на най-информативните методи за откриване на маркери на HCV инфекция;
  • определянето на критерии за обективна оценка на получените резултати;
  • разработване на оптимални алгоритми за провеждане на лабораторни изследвания;
  • въвеждане на система за подобряване на откриването на маркери за HCV инфекция.

    В основата на лабораторно диагностициране на хепатит С HCV служи познания за неговата репликация, информация за динамиката на външен вид и изчезване на маркери на инфекция, както модерен имунохимичен и молекулярни биологични методи за откриване на антигени, антитела и нуклеинови киселини.

    ВИРУС ХЕПАТИТ С. HCV за първи път е идентифициран през 1988 г., когато група изследователи ръководи от М. Houghton и Choo Q.L, прилагане на нови методи molekulyarnobiologicheskie изследвания, и се клонира sekvinirovala генома на вируса [I]. Частицата от вируса на хепатит С има сферична форма със среден диаметър около 50 nm [2,3]. Опитите за визуално откриване и проучване на структурата на вируса на хепатит С, предприета след откриването на вируса, но досега там не са добре документирани резултати от тези проучвания, вероятно поради трудностите на натрупване на вирусни частици в необходимите количества.

    VGSedinstvenny член на рода Hepacivirus в семейството Flaviviridae, което включва вируси, като например диария вируса бикове и чума по свинете (рода Pestivirus) и вируса на жълта треска, Dang вируса и GB-вирус: GBV-А, GBV-B и GBV-C / HGV (рода Flavivi-rus). Структурата на вируса на хепатит С може да бъде представена както следва (Схема № 1). Нуклеокапсид включва РНК на вируса на хепатит С нуклеокапсид горния покрит с липидна обвивка вдлъбната в него обвивката протеини, кодирани от HCV РНК. Геномът на вируса е представен от едно верижна линейна РНК молекула с положителна полярност, с дължина около 9600 нуклеотиди. Организацията на HCV генома е подобна на другите флавивируси. Разграничава две зони, които кодират структурни и неструктурни (функционални) протеини. Гени, кодиращи структурни протеини, се намират в 5 'региона на генома на вируса и неструктурни в 3' региона. Генът на HCV има единична отворена рамка за четене (ORF), единична полипептидна (приблизително 3000 аминокиселини), които под действието на клетъчни и вирусни протеази нарязани на структурни и неструктурни протеини.

    Фиг. 1. Структурни елементи на HCV

    Структурните протеини включват протеини, кодирани от Core, El и Е2 с HCV РНК зони. Той разкрива три форми на С-HCV протеини: пълна дължина (р21) с молекулно тегло - 21 кД, скъсен (р19) и форма (Р16) се откриват в нуклеолата на инфектираните хепатоцити. На повърхността на С-протеина носи различни силно консервативен В-клетъчен епитоп, наличието на който е изключително важен за откриване на антитела за HCV в лаборатория диагностициране на хепатит С.

    РНК регионите на HCV-Е1 и Е2 кодират протеини с молекулно тегло 31 и 70 kD. Тези протеини имат няколко места на N-гликозилиране; В Е1 белтък бяха идентифицирани до 6 такива места, а в Е2-11. Информация за малък белтък, р7, беше намерена в раздел Е2, който не беше намерен във вирусната структура.

    Маркиране региони, разположени близо до 3'-края на HCV РНК - като зони носещи информация за неструктурни протеини на вируса, което показва, че тези протеини не са структурни компоненти на вирусната частица. В неструктурната зона на HCV РНК са определени места, обозначени като: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B. Повечето протеини, кодирани от неструктурни зони на HCV РНК, са необходими за репликация на вируса.

    Сравнителен анализ на нуклеотидни последователности на изолати на HCV РНК произвежда в различни региони на света, и дори в хода на заболяването от същия пациент показва основната функция на вируса - висока хетерогенност РНК. Позицията на голяма генетична променливостта на HCV РНК е в основата на теории да се обясни: дългосрочно (понякога през целия) носител на вируса, често развитие на хронично заболяване, трудности при установяване на ефективно лечение и ваксини. Най-значителните разлики HCV РНК последователности са концентрирани в N-терминалната част на региона Е2, който е определен - "хиперпроменлива област" (HVR) [4].

    Понастоящем има 6 основни генотипа и над 100 подвида HCV. Генотипите 1а, 1с, 2а, 2с, 2с и 3а съставляват повече от 90% от HCV изолатите, получени в Северна и Южна Америка, Европа, Русия, Китай, Япония и Австралия / Нова Зеландия [5]. Генотипи 4, 5а и 6, съответно, са регистрирани в Централна и Южна Африка, Югоизточна Азия. В Русия и страните от ОНД се регистрира разпространението на генотип 16 (не по-малко от 68,9%) [6,7]. Смята се, че пациенти, инфектирани с генотип 1 (особено 1с), реагират по-лошо на лечение в сравнение с пациенти, инфектирани с други генотипове на вируса.

    HCV пациент циркулира като популация на вирусни частици, чиито геноми различават един от друг с 1-2% (kvazispetsifichnosti) в резултат на мутации, които се натрупват по време на инфекция и / или направени в пациента по време на инфекция. Тези мутантни форми могат да осигурят по-силни или репликация може да помогне на вируса да избегнат имунния отговор и потенциално да повлияят на резултатите от остра инфекция, разликите в хода на заболяването и реакцията на IFN [8].

    ОПРЕДЕЛЯНЕ НА АНТИ-НСV. След откриването на HCV вирус и се определя неговата роля в развитието на след трансфузия хепатит - "нито А нито В" изследователите са провокирани да се разработят методи за откриване на тези с HCV и са подходящи за диагностика на остра и хронична хепатит В. Установено е, че антигени HCV циркулират в изключително ниски концентрации и очевидно е, че методологичното ниво от края на 80-те години на ХХ век, използвано за откриване на вирусни антигени, е очевидно недостатъчно.

    През 1989 г. група изследователи на фирма "Хирон Corporation" под ръководството на Q-L.Choo извършва клонирането на HCV РНК и е имунореактивни олигопептиди, които реагират с антитела, циркулиращи в кръвта на пациенти с хроничен хепатит "нито А нито Б". Тези олигопептиди стават основата на диагностичните лекарства за откриване на антитела срещу HCV. Това е довело до бърз напредък в разработването и производството на диагностични продукти. Основният метод, използван за откриване на анти-HCV, е твърдофазов ензимно-свързан имуносорбентен анализ като метод, който отговаря на изискванията на практическото обществено здраве - т.е. Висока чувствителност, специфичност и лекота на поведение.

    Като се има предвид, че HCV продължава в кръвта на пациенти с остър и хроничен хепатит С, във връзка с анти-HCV диагностични продукти фокусират агенти концентрират върху създаването на тестови системи за откриване на антитела, осигурява възможно най-пълно идентифициране на носители на вируса, и възможно най-рано диагностика на остра инфекция. Разнообразието от антигени и антигенни детерминанти, кодирани от HCV РНК зоната на структурни и неструктурни, посоката, определена в дизайна на диагностични препарати за тази конструкция и олигопептиди, използвани за тяхното създаване. От времето на откриването на HCV са създадени диагностични системи от три поколения (Таблица 1).

    Таблица 1
    Диагностични лекарства за откриване на анти-HCV [9]

    Използваните пептиди,
    зони на HCV РНК, в която
    те са кодирани

    % откриване на носители
    HCV

    Времето на първия
    откриване
    анти-HCV от
    ранна жълтеница

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 и NS4
    NS3p NS3
    С 100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 и NS4
    NS3p NS3
    Пептид NS5

    Въвеждането на допълнителни пептиди, предимно c22-3 (Core), в диагностични лекарства от 2-ро и 3-то поколение позволи да се реши основната задача, т.е. да се повиши чувствителността, специфичността и, най-важното, откриваемостта на анти-HCV. Благодарение на диагностичните криви от третото поколение е възможно да се открият до 97% от HCV носителите. В същото време, определена дискусия беше предизвикана от въвеждането на пептид, кодиран от NS5 HCV РНК регион, в диагностика. Според някои изследователи наличието на този пептид не е от съществено значение за подобряване на качеството на диагностичното лекарство. [10,11]. Обаче, антитела срещу NS5 могат да бъдат открити в по-ранен етап от инфекцията, което подобрява качеството на лабораторната диагностика на остър хепатит С. [12]

    Понастоящем диагностичните препарати от третото поколение се използват в целия свят, включително в Русия. Пептидите, използвани в диагностични препарати, получени чрез рекомбинантна технология (например, диагностични фирми: "Диагностични средства", Нижни Новгород; "вектор", Новосибирск; "Roche", "Абот" и др.) Или синтетични ( 000 MC "Авицена", Санкт Петербург, "Органон" и др.). Диагностиката, в която и двата вида пептиди се използват едновременно, получиха означения като препарати от 4-то поколение. Според техните характеристики тези лекарства нямат съществени различия. Сравнителните тестове, редовно провеждани от Министерството на здравеопазването на Русия, показват сравнима чувствителност на диагностичните препарати на местни и чуждестранни производители.

    Установено е, че използването на диагностика трето поколение за откриване на анти-HCV сред имуннозащитени населението (например кръводарители) се оценява на 98,8-100%. В същото време при имунокомпрометирани индивиди, като например пациенти след бъбречна трансплантация, костен мозък, или лица, заразени с HIV, на фигурата е много по-ниска - 50 - 95% [12]. S.George et al. [13] показа, че 8,4% от пациентите с HIV инфекция имат фалшиво-негативни резултати от откриването на анти-HCV. И при такива пациенти в хода на наблюдението може да се регистрира серо-реверсионен ефект; регистриране на положителен резултат след серонегативния период на анти-HCV [14].

    Един от най-важните проблеми при провеждането на изследвания за наличие на анти-HCV е фалшиво положителни резултати. Техният външен вид може да се дължи на неспецифичното взаимодействие на реакционните компоненти, възможните кръстосани реакции с други вирусни антигени и много други фактори. Нивото на фалшиво положителни резултати при откриването на анти-HCV с различни диагностични лекарства може да достигне 10-20% [15,16]. Наблюдавано е повишено ниво на такива резултати при пациенти с онкологични и автоимунни заболявания, лица с имунодефицитни състояния и пациенти със сифилис [16,17]. Наличието на фалшиви положителни резултати води до задачата на лабораторния работник да ги разграничи от истинското откриване на анти-HCV. За да се реши този проблем, серумът се открива в кръвния серум на HCV РНК. Отрицателният резултат от откриването на HCV РНК обаче не позволява да се говори за наличието на фалшиво положително откриване на анти-HCV. Трябва да се има предвид, че анти-HCV може да циркулира по изолиран начин в кръвта на пациент, който е възстановен от остър хепатит С (10-15%) или елиминира HCV РНК в резултат на продължаващата терапия.

    ПОТВЪРЖДЕНИЕ (ДОПЪЛНИТЕЛНИ) ИЗПИТВАНИЯ. За да се разграничат фалшиво положителни проби и проби, които наистина съдържат антитела срещу HCV, са разработени допълнителни (допълващи) тестове. Най-често при тези тестове се използва принципът на имуноблот [например, тестът RIBA ("Ortho-Clinical Diagnostics"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika)], когато адсорбира върху нитроцелулозна мембрана под формата на отделни ленти антигени, кодиран от различните зони на HCV РНК. Анти-HCV взаимодейства с адсорбирани антигени с белязани с ензим антитела срещу човешки IgG, последвано от откриване със субстратен комплекс. В допълнение имуноблот както и допълнителни тестове използват диагностични средства за откриване на анти-HCV срещу специфични антигени, кодирани от различните зони на HCV РНК [ "Спектър 4" ( "ImBio" Нижни Новгород; RecombiBest АНТИ-HCV спектър "- ZAO" Vector Best ", Новосибирск, IFA-Anti-NSO-Spectrum, НПО" Диагностични системи ", Нижни Новгород].

    Проектиране и изпълнение на тези тестове е успоредна с въвеждането на скрининг тестове за анти-HCV, повтаряне на принципа на разширяване на спектъра на пептиди, използвани при всяко следващо поколение на диагностични агенти. Следователно, диагностичният RIBA-III се различава от предишното поколение чрез добавяне на пептид, кодиран от NS5 зоната. Принципи да потвърди положителния резултат на откриване на анти-HCV главно включват: възможност (в някои случаи) по-точни резултати на ензимната реакция чрез взаимодействие с индивидуални пептиди, както и употреба в разширен спектър DIAGNOSTICUM пептиди, които не се използват в скринингови анализи. Само въвеждането на нови пептиди позволява да се увеличи диагностичната стойност на потвърждаващите тестове.

    Тълкуването на резултатите, получени например при такъв тест като RIBA-III, включва три възможни отговора: положителен, отрицателен и неопределен резултат. Последният се издава при липса на ясни индикации (съгласно инструкциите, приложени към диагностичния комплект), което дава възможност да се определи категорично наличието или отсъствието на анти-HCV в пробата за анализ. Корелацията на спектъра на записаните отговори по време на потвърждаващите тестове варира в зависимост от характеристиките на групите пациенти, при които анти-HCV се откриват главно [18]. Съгласно J.M. Pawlotsky et al. [19], в половината от случаите на резултатите, интерпретирани като "неясни", може да бъде открита HCV РНК. Според нас валидността на отговора - "неясният резултат от откриването на анти-HCV", дадена от лаборанта на клинициста, е очевидна не само при извършването на потвърдителния тест, но и при рутинните изследвания за наличието на анти-HCV. Необходимостта от такова тълкуване на получените резултати е отражение на текущото състояние на лабораторна диагностика на хепатит С.

    ОПРЕДЕЛЯНЕ НА IgM АНТИ-HCV. Понастоящем са създадени и се произвеждат диагностични комплекти за откриване на IgM анти-HCV от фирмите: "Vector Best"; "Диагностични системи"; "ImBio", "Абот" и др. В етапа на проектиране на диагностични комплекти са разработени за ELISA комплекти, въз основа на които пептиди са кодирани от различни региони на HCV РНК [20]. Изборът се спира върху пептида, кодиран от областта на ядрото на HCV РНК и откриването на IgM антитела към него. Както при тестовете за откриване на анти-HCV (IgG), фалшиво положителни резултати могат да бъдат записани в изследването на IgM анти-HCV. Според Stevensona D.L. с et al. [21], до 70% от пациентите с хроничен хепатит С, с присъствието на анти-HCV IgM едновременно има повишено ниво на ревматоиден фактор, който допринася за появата на фалшиви положителни резултати. В същото време, според Pawlotsky J.M., наличието на ревматоиден фактор не влияе върху качеството на откриване на IgM анти-HCV [22].

    ОПРЕДЕЛЯНЕ НА АНТИГЕНОВЕТЕ НА НСV. Възможността за определяне на HCV антигени привлича вниманието на изследователите веднага след откриването на вируса. Теоретичната възможност на тестването им е доказана [23] Krawczynski К. и др установено, че имунохистохимия в чернодробната тъкан на HCV антигени, демонстрира специфичността на имунофлуоресценция блясък. Използването на поли- и моноклонални антитела с различни HCV антигени е установено наличието на ядро ​​HCV Ag, антигени кодирани NS3 и NS4 зони на HCV РНК в ядрото и цитоплазмата на хепатоцитите, в 60-90% от пациентите с хронична HS [24].Въпреки това, допълнителни изследвания показват, че антигени на HCV могат да бъдат открити в по-малко от 5% от чернодробните клетки.

    Първите диагностични тестови системи ( "Ортопедия антителата на основния антиген (миши моноклонални) EL1SA System Test" и "Imucheck F-HCV Ag Ядро Kokusai") за откриване на HCV антиген на пазара се появиха на имунологични продукти, през 1999. За целите на откриването се избира основен HCV антиген, който се определя като се използва ELISA вариант в твърда фаза, проектиран на базата на моноклонални антитела. Първите изследвания за прилагането на тези тестове са идентифицирани тяхната висока чувствителност, специфичност, и обещаващи приложения, най-вече в услуга на кръвопреливане [25,26]. създаден:

  • възможността за определяне на ядро ​​Ag HCV в серум или плазма;
  • специфичност на откриването на Core Ag HCV;
  • наличие на лица с циркулиращ антиген в кръвна серонегативна за анти-HCV;
  • чести (90,3%) откриване на Core Ag HCV в кръвния серум с наличие на анти-HCV и HCV РНК [25];
  • директна корелация между концентрацията на HCV РНК и откриването на Core Ag HCV [25];
  • намаляване на фазата на "прозореца" - от момента на инфекцията до първия положителен резултат от откриването на анти-HCV. Тя определя, че HCV ядро ​​Ag възможно да се установи 83% от случаите (п = 24) на следващия ден след първото откриване на HCV РНК [26], и дълги (средно 26 дни) преди появата на анти-HCV [27].

    МЕТОДИ ЗА ОТКРИВАНЕ НА RNA HCV. Съвременният стадий на лабораторна диагностика на хепатит С може да се характеризира като етап от началото на широкото прилагане на молекулярно биологични методи за откриване на HCV РНК. По-голямата част от методите за откриване на нуклеинови киселини са тествани за откриване на HCV РНК. Принципите за конструиране на диагностични препарати и тяхното използване за откриване на вирусна ДНК или РНК са посветени на значителен брой прегледи на литературата, публикувани както в домашни [28], така и в чуждестранни публикации [29]. Всички тези методи могат да бъдат разделени на две групи, които се основават на прилагането на принципите на хибридизация без амплифициране на избрания регион на нуклеиновата киселина или с тяхното амплифициране, което значително увеличава разделителната способност на метода.

    Метод на хибридизация на базата на комбинацията от маркирани хибридизационни сонди (генетично конструирани или синтетични молекулни структури, съдържащи нуклеотидни последователности, комплементарни на избрани РНК места). Резултатите се вземат под внимание от интензивността на сигнала, идващ от марката в състава на образувания комплекс.

    При хепатит С, този метод за откриване на HCV РНК намират приложение за идентифициране директно в хепатоцити, при тестове, определени като in situ хибридизация [30]. Възможността за директно откриване на HCV РНК в тъканите направи възможно откриването му в мононуклеарни кръвни клетки, клетки на слюнчените жлези и други тъкани на пациента с хепатит С [31, 32].

    Методът на хибридизация, използван за откриване на HCV РНК, позволява да се демонстрира наличието на отрицателни (репликативни) вериги на HCV РНК, което показва активна репликация на вируса [33].

    Методът на полимеразната верижна реакция - понастоящем най-широко използваният методичен метод, който е в основата на почти всички молекулярни биологични методи за откриване на HCV РНК. Освен това, определянето на HCV РНК е възможно както в качествена, така и в количествена версия, което е особено важно за назначаването, мониторинга и оценката на ефективността на използваната терапия.

    Основните варианти на метода могат да бъдат идентифицирани, както следва:

  • полимеразна верижна реакция (PCR);
  • лигазна верижна реакция;
  • NASBA;
  • TMA (Транскрипционно-амплифицирана реакция на усилване, транскрипция-медиирано усилване).

    Полимеразна верижна реакция - широко използван както в Русия, така и в чужбина метод за откриване на НСV РНК. Той се основава на многоцикличен процес, напомнящ естествената репликация на нуклеиновата киселина, като всеки цикъл се състои от последователни етапи.

    От проучвания материал (серум или кръвна плазма, чернодробна биопсия) се освобождава HCV РНК. Като се има предвид, че HCV нуклеинова киселина е представено чрез РНК и за амплифициране на сДНК молекула е необходимо, с помощта на ензим - обратна транскриптаза, формирането на едноверижни молекули на HCV сДНК. В следващата стъпка към предварително определен диапазон на всяка от вериги са свързани т.нар HCV ДНК Примери - къси олигонуклеотиди, комплементарни на известните нуклеотидни последователности. Сравнение на първичната структура на региона 5'UTR на генома на различни HCV изолати разкрива тяхната малка вариабилност (между генотипове, хомоложни на нуклеотиди - 92-98% и 98-99% в генотип). Това прави предпочитането да се избират праймери от тази зона на HCV РНК и тяхното използване в системи за диагностични тестове, произведени у нас и в чужбина.

    Освен това с помощта на ДНК-зависимата ДНК-полимеразна ензима се синтезират нови ДНК секвенции. В момента, източникът на този ензим е най-често използвани Thermophilus termus бактерии (Tth-полимераза) или aquaticus Thermophilus (Taq-полимераза). С термична стабилност в присъствието на манган и магнезиеви йони, ензимът може да се използва едновременно за синтез на допълнителни едноверижни молекули на HCV сДНК и амплификация на избрани части сДНК. В крайния етап на един цикъл на реакцията ДНК синтеза синтезира нови вериги от комплементарни HCV сДНК. Множество повторения на реакционната цикъл води до натрупването на HCV сДНК фрагменти, които могат да бъдат регистрирани чрез полиакриламидна гел електрофореза, последвано от визуално откриване, или с помощта на хибридизация с олигонуклеотидни проби, което увеличава чувствителността и специфичността на диагностични продукти, използвани. Използването на праймери, белязани с ензими, дава възможност за записване на резултатите от PCR при използване на ензимен имуноанализ.

    Постоянната цел на изследователите, които разработват диагностични системи за откриване на HCV РНК, е повишаване на чувствителността и специфичността. Тази цел се обслужва от PCR варианта, наречен "nested PCR" [34]. Отличителна характеристика на този метод от "класическия" е едновременното използване на две двойки праймери, единият от които е комплементарно свързан с вътрешната област на ампликона, получен след първия кръг на амплификация. В същото време се смята, че този вариант на PCR има по-висок риск от замърсяване на пробите, което може да доведе до фалшиви положителни резултати [35].

    Остра необходимост за идентифициране на HCV РНК и трудностите, свързани с производство в голям мащаб на силно чувствителни и специфични диагностични комплекти за диагностична PCR идентифицирани широкото използване на продуктите, произведени в лаборатории. Сравнение на тези тестови системи, така наречените - тест "начало" ( "в тестове къща"), е доказал своята висока вариабилност в чувствителност и специфичност, както и липса на възпроизводимост на резултатите между лаборатории и диагностични препарати серия. По този начин, напълно в състояние да идентифицира правилно присъствието или отсъствието на вирусна РНК в контролните проби, предвидени по време на първия цикъл на Европейския оценката на контрол "външен" качество на HCV РНК (1996) 136 лаборатории само 22 (16%) [36]. Подобен резултат се наблюдава в нашата страна, по време на една и съща операция в рамките на Федералния контрол по външните Quality (2001), когато 14-те участващи лаборатории само 3 (21.4%) са били в състояние да реши правилно този проблем. [37]

    Причините за фалшиво-отрицателни и фалшиво-положителни резултати от откриването на HCV РНК са различни. С фалшиво-негативни резултати:
    - загуба или унищожаване на HCV РНК в подготовка за реакцията на клиничния материал;
    - наличие в пробата на инхибитори, които засягат различни компоненти на PCR. Тези инхибитори са представени от различни химични или протеинови вещества. Например: наличието на инхибитори на обратната транскриптаза в течността на сперматозоидите не позволи да се открие HCV РНК и да се говори за възможността за прилагане на сексуалния път на предаване на хепатит С [38]; наличието на хепаприн [39]; високо ниво на криоглобулини в кръвния серум [40];
    - несъответствие с термичния режим на съхранение и транспортиране на клинични материали. С фалшиви положителни резултати:
    - замърсяване между проби (при обработка на проби и / или работа с реакционната смес), включително замърсяване с положителна контролна проба;
    - замърсяване с продукти преди амплификация (ампликони), които могат да замърсят пробите и разтворите чрез аерозоли или лабораторно оборудване.

    Масовото въвеждане на PCR диагностика по дефиниция на РНК на HCV е поставило органите на практическото здравеопазване задачата да преминат към ново ниво на провеждане на лабораторни изследвания. Изолиране на изолирани зони за основните етапи на PCR (за подготовка на пробите, усилване, за да се вземат предвид резултатите); Отделен комплект за всеки етап от реакцията на лабораторно облекло, автоматични пипети; наличието на стандартни диагностични комплекти и, най-важното, наличието на висококвалифициран лабораторен персонал позволява да се намали нивото на неверни резултати.

    Първият стандартизиран комплект за определяне на HCV РНК ("AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") е произведен през 1993 г. През годините са развити комплекти за откриване на HCV РНК, чиято основна цел е да повишат тяхната чувствителност и специфичност. При проектиране на "Amplicor TM HCV" използва няколко оригинални методически техники, които позволяват да се открият или над 100 копия на HCV РНК на мл., Както и да се справят с евентуални случаи на заразяване на пробите и решения, използвани в комплекта. Използване на ензим - amperazy и deziksiuridintrifosfata (dUTP) позволява да се унищожи в първата амплификация цикъл предходната aplikony което може да настъпи замърсяване. Унищожаване amperazy в края на първия цикъл усилване (при 55 ° С) не позволява на ензима да унищожи ампликони избрани като цел. Важна иновация бе въвеждането на вътрешен контрол. Значението на това нововъведение се състои във въвеждането на пробата във всяка последователност на такива амплифицира HCV РНК част, която впоследствие се открива при използване на подходящи праймери в реакцията на амплификация в същия режим. Отсъствието на положителна реакция при откриването на вътрешна контрола предполага фалшиво отрицателна реакция към наличието на HCV РНК в пробата. Diagnosticum следващото поколение лекарство е определен - "HCV Amplicor 2,0", когато се използва граница на чувствителност с 50 молекули на HCV РНК.

    Система на HCV РНК с помощта на "Рош" Дружеството комплекти не може да се разглежда отделно от тяхната апаратура, определя високото качество на тестване. Разработчиците на метода се стремят да автоматизират напълно всички етапи на реакцията. Въплъщение на тази идея е система на "COBASAmpliPrepTM", която позволява напълно да се автоматизира процеса на извличане на HCV РНК, усилване и откриване, като по този начин намалява риска от фалшиви положителни и фалшиво отрицателни, при поддържане на висока чувствителност и специфичност [41].

    Лигазова верижна реакция на откриване на РНК BGC (LCR). Методът се основава на способността на ензима "ДНК-зависима ДНК лигаза" да пресича (лигира) счупването на фосфодиестерната връзка в ДНК в присъствието на АТР и Mg2 + йони. Както при "класическата" PCR за откриване на HCV РНК, първият етап на LCR е обратна транскрипция за получаване на HCV сДНК. Освен това, ДНК лигаза свързва две двойки праймери (комплементарни на 5 'некодирания регион на HCV РНК), които допълнително се амплифицират. Откриването на LCR амплификационни продукти се извършва, като се вземе предвид реакцията антиген-антитяло. Всеки от двата праймера е означен с различен хаптен. Първият от тях се улавя от антитела, адсорбирани върху микрочастици. След промивната процедура, използвайки втора двойка антитела, маркирани с флуоресцентен маркер, те селективно взаимодействат с хатента в продукта за амплификация, последвано от реакция на субстрата и като се вземе предвид флуориметърът.

    Чувствителността на този метод е около 200 копия на HCV РНК в ml, което позволява да се използва за решаване на различни клинични и диагностични проблеми [42]. Понастоящем диагностичните комплекти за откриване на HCV РНК, базирани на LCR, се произвеждат от Abbott.

    Nucleic Acids Seaquencence Amplification - NASBA -методът за откриване на HCV РНК се основава на едновременното действие на три ензима: обратна транскриптаза на вируса на птичия миелобластом, RNAsease Н и РНК полимераза Т7 [43]. За разлика от RT PCR, в първия етап не се извършва обратна транскрипция на HCV РНК. С помощта на използваните ензими може да се получи повече от 10 (9) копия на HCV кДНК сайта в рамките на 90 минути [44]. Способността за извършване на реакцията при ниски температури (+41 ° С) значително опростява операцията и позволява да се откаже от оборудването, осигуряващо циклични промени при високи температури. Резултатите от реакцията се вземат под внимание чрез електрохимилуминесценцията. Въпреки факта, че чувствителността на NASBA е близка до RT PCR, методът не се използва широко за откриване на HCV РНК. Понастоящем се разработва вариант на метода, съчетаващ принципите на NASBA и "RT-PCR в реално време".

    Методът на транскрипционно-медиирана амплификация (ТМА) се различава от PCR и LCR главно по това, че HCV РНК фрагментите са директно амплифицирани, а не HCV сДНК. В началния етап на реакцията праймерът (№ 1) е прикрепен към HCV РНК и копие от целевата молекула, сДНК се синтезира с помощта на ензим (обратна транскриптаза). Обратната транскриптаза, също притежаваща активността на RNase-H, разрушава вирусната РНК в РНК-сДНК хибрида. След това към сДНК молекула се прикрепва втори праймер, последвано от завършване на двойноверижна ДНК чрез обратна транскриптаза. Използвайки друг ензим, РНК полимеразата, РНК транскрипция с сДНК се получава, което води до образуването на 100 до 1000 копия на ампликона на HCV РНК в един цикъл на реакция. Праймер @ 2 е прикрепен към тези РНК-приложения с по-нататъшен синтез на кДНК копия и разрушаване на РНК молекулата. Добавянето на праймер № 1 към сДНК, последвано от завършване на двойноверижна ДНК, задейства следващия цикъл на амплификация. Резултатите от реакцията се вземат предвид в луменметъра, тъй като образуваните РНК ампликони взаимодействат специфично с ДНК сонди, белязани с хемолимунофори.

    Като предимства на метода TMA при откриване на HCV РНК, се отбелязва:

  • реакция при по-ниски температури в сравнение с PCR;
  • образуването на по-голям брой ампликони в един реакционен цикъл, което намалява времето, необходимо за получаване на крайния резултат (30-40 минути), и повишава чувствителността на реакцията (50 копия / ml) [45].
  • намаляване на риска от замърсяване, тъй като РНК е по-малко стабилна от ДНК.

    Сравнителните проучвания за откриване на HCV РНК чрез TMA и други методи показаха високо ниво на съвпадение на резултатите [45].

    Комбинацията от принципите на хибридизация и амплификация стои в основата на метода за откриване на HCV РНК, обозначен като "Методът на хибридизация, използващ разклонени сонди или разклонен ДНК анализ (bDNA) [46]. За разлика от PCR в този тест, амплификацията не включва молекулите на HCV сДНК, но на сигнала. Реакцията се осъществява в 96-ямкови плаки, върху които се адсорбира HCV РНК фрагменти от 5 'нетранслирана зона и HCV RNA ядрен ген. Поради последващо свързване със синтетичен ДНК молекула разклонена и хибридизация с сонда е белязана с алкална фосфатаза усилвател и последващо ензимна реакция се постига чрез рязко увеличение на приемания сигнал. Текущо има diagnosticums трето поколение на пазара на диагностика (Bayer 3.0 Hepati-тис С Virus RNA Количественото от Brna) с чувствителност за идентифициране 520 IU / мл (2500 копия на HCV РНК).

    КОЛИЧЕСТВЕНО ОТКРИВАНЕ НА HCV РНК. За оценка на концентрацията на HCV РНК се използва количествен вариант на PCR. Първоначално, концентрацията на HCV РНК опит за характеризиране редни стойности, като "+", "++" и т.н., визуално отразяващ интензитета на лентите, получени чрез електрофореза на амплификационни продукти, или чрез ограничено разреждане, т.е., от наличието на положителен резултат на финала точка на титруване. Трудности стандартизират всички PCR стъпки не позволяват да се оцени обективно концентрацията на HCV РНК, което води до значителни грешки интерпретация на резултатите.

    В момента резултатите от научните изследвания, изразени в количествено отношение: на броя на копията на HCV РНК, които се съдържат в 1 мл, в абсолютно изражение или logarifmeticheskom (влезте 10).. Въз основа на факта, че концентрацията на HCV РНК открива отразява броя на вирусни частици, тази цифра е посочена като "вирус еквивалент (екв)", с добавяне на префикс к (килограм хиляди) или М (ррт). Друг начин за изразяване на броя на вирусните частици е техните тегловни еквиваленти. Например, в грамове или пикограма (PG 1 съответства на приблизително 1 милион екв). Разнообразието на приложените количества затруднява тълкуването на резултатите, получени в различните лаборатории. Следователно, Expert комитет на СЗО за биологичното стандартизация направи "международен референтен материал", съдържащ HCV РНК (liofilnovysushennaya кръвен серум, съдържащ HCV РНК генотип 1), концентрацията на който се изразява в международни единици (IU / мл) [47]. Специалните фактори ни позволяват да преизчислим получените стойности на концентрация в международни единици.

    Почти всички варианти на PCR се използват за определяне на концентрацията на HCV РНК. В същото време редица специфични изисквания се представят на диагностичните лекарства, най-важната от които е стриктната линейност на резултатите, т.е. увеличаване на сигнала на откритата реакция с повишаване на концентрацията на HCV РНК в тестовата проба. Използването на вътрешни стандарти с различно съдържание на HCV РНК избягва много методологични грешки, които могат да повлияят на крайния резултат от реакцията [28]. Чувствителност прилага диагностика (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCX HCV РНК количествен анализ) може да открива HCV РНК, започващи от 50 копия на мл [48,49], което е особено важно да се предскаже ефективността на антивирусна терапия избрана.

    PCR в реално време ("RT PCR в реално време") -един от най-обещаващите варианти за количествен метод за откриване на HCV РНК. Методът и хардуерът му са разработени съвместно от специалисти от Roche и Percin Elmer. Принципът на метода е способността да се хидролизират сДНК последователности в посока 5 '- 3'. Специална сонда, маркирана с две флуоресцентни багрила с близка абсорбция и флуоресцентни максимуми, се използва в реакцията. В присъствието на амплификационни продукти Tag-полимераза разцепва сондата, което води до предотвратяване на багрило пренос на енергия от една молекула към друга и по този начин предотвратява фотона. Специално звено поддържа регистри за провеждане на реакцията и математическо моделиране на флуоресценция на всеки етап от реакцията, да предоставят информация за първоначалната концентрация на HCV РНК.

    Отличителна черта на "реално време PCR" се счита за възможно да се получи информация за присъствието на HCV РНК директно по време на реакцията, като по този начин намалява времето анализ комбинира с висока чувствителност и линейността на резултатите [50]. Според Татяна Яшина и съавтори, този метод позволява да се открият от 200 копия на HCV РНК в ml. [51].

    МЕТОДИ ЗА ГЕНОТИПИРАНЕ НА РНК ВХС. Определянето на принадлежността на HCV към конкретен генотип и подтип намери своето приложение за решаване не само на чисто научни, но и на практически въпроси. Например: търсене на източника на инфекция при епидемии от хепатит С или прогнозиране на ефективността на използваната терапия.

    "Златен стандарт" генотипа HCV - директно определяне на първичната структура на HCV РНК и последващото му филогенетичен анализ [52], което позволява ясно характеризират вирус изолат. Можете да получите тази информация, като използвате следните опции за секвенции:

  • директно;
  • въз основа на стандартно клониране;
  • секвениране на продукти от PCR реакцията (Limited-Sequencing).
    Независимо от точността на резултата, методът на директната последователност не се използва в практическата медицинска помощ, поради техническите трудности при провеждането на изследването и високата цена на работата. В същото време наличието на информация за първичната структура на HCV РНК е референтният метод за генотипизиране, а наличието на автоматични устройства за секвениране опростява резултатите.

    Понастоящем в повечето случаи методите, базирани на използването на PCR с типо-специфични праймери, се използват за генотипиране на HCV РНК. Първото генотипизиране на HCV РНК се извършва от N. Okamoto et al. През 1992 г. с RT-PCR [53], който включва две стъпки на амплификация. Първият от тях се провежда с универсални праймери за всички генотипове на HCV, а втората със смес от типово-специфични праймери, за да се получат специфични продукти за амплификация с различни дължини. Наличието на определен генотип се оценява с размера на амплифицирания продукт. Като праймери се използват специфични сонди тип, информация за която се намира в 5'UTR, Core или NS5 участъци на RNKVS [54].

    Хибридизацията на амплифицираните продукти с ген-специфични сонди адсорбирани (от нетранслираната област на HCV РНК 5 '), адсорбирани върху нитроцелулозна мембрана, лежи в основата на теста - означен "INNO-LiPA HCV, Inno-генетика" [55]. Първоначално с помощта на този тест е възможно да се характеризират генотипите: la; фунта; 2а; 2b; 3а; 3; 4 и 5а. Впоследствие тест-системата втората генерация "INNO-LiPA HCV II, Innogenetics" позволява да се разграничат всички генотипове 6 и допълнително 2с; 2г; 2i; 3в; 4а-Н; 6а и 10а. [56]

    Методологичният арсенал на HCV генотипа не се ограничава до горните методи и включва разнообразни методи:

  • генотипиране въз основа на анализа на рестрикционните профили на амплифицираните продукти (RFLP). Продуктите на амплификация на HCV РНК фрагменти (5'UTR-област или NS5 HCV РНК регион) се усвояват с рестрикционни ензими. Фрагментите, образувани, варират по дължина, в зависимост от рестриктивните места, в които те са разцепени. Резултатите от електрофорезата и тяхното сравнение позволяват да се идентифицира HCV генотипът в тестовата проба [57]. Сравнението на резултатите от генотипа, използвайки метода PCR-RFLP със секвениране на данните, показва висока степен на съвпадение на резултатите - 95% [58].
  • генотипиране на базата на SSCP метода (оценка на конформационния полиморфизъм на едноверижни ДНК фрагменти). 5'-нетранслираната област на HCV РНК, която има минимален набор от нуклеотидни вариации, отличаващи генотипове един от друг, беше избрана като обект на изследването. Този факт определя възможността за прилагане на общи праймери за генотипизиране [59].

    СЕРОТИПИНГ Анти-HCV Изследвания е възможно благодарение P.Simmonds сътр, се установи наличието на антитела, насочени към епитопи genotipspetsifichnym които кодирана информация NS4 HCV РНК зона [60]. С diagnosticum за ELISA конструирана на базата на синтетични пептиди, способни да се диференцират случаи на хепатит С, причинени от вируси 1, 2 и 3 генотип (89% съвпадение с резултатите от генотип). testsistem развитие използвайки синтетични и рекомбинантни антигени, кодирани от NS4 и основните зони на HCV РНК засилено списък типични вирусни варианти и присъствието съдия подтипове (1а, LB, 2а, 2Ь, Над, и 4а) [61,62]. Понастоящем търговски освобождаването на диагностични препарати за серотипа в изпълнение на място ELISA - "NA Mureh 1-6 серотипа анализ Murex Diagnostics", и в изпълнение "Имуноблотът" - RIBA HCV серотипа анализ, Chiron Diagnostics. Сравнителните данни за серотипизиране и генотипизиране на HCV РНК показват висока степен на съвпадение на резултатите, достигайки 95% [62].

    Серотипирането на анти-HCV в сравнение с генотипа на HCV РНК има такива предимства като простота на реакцията и по-ниска цена. В същото време, този метод не може в никакъв случай да замести генотипа. Резултатите от серотипа на анти-HCV свидетелстват за вида на анти-HCV при текущата или преди това предавана инфекция. В някои случаи (най-често при пациенти с хемофилия) се регистрира едновременно откриване на анти-HCV на различни подтипове, което може да показва множествена инфекция с различни подвидове и генотипове на HCV [63]. В допълнение, при пациенти с хепатит С на фона на изразено състояние на имунна недостатъчност, РНК може да бъде единственият маркер, което прави невъзможно извършването на серотипизиране.

    ОТКРИВАНЕ И ТРАКСТИРАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ ОТ ИЗПИТВАНЕТО НА СЕРОЛОГИЧНИТЕ МАРКЕРИ НА ХИВ-ИНФЕКЦИЯТА. Широка гама от серологични маркери на настоящ или бивш HCV инфекция, както и съвременна методологическа рамка може да реши много проблеми по лабораторна диагностика и превенция на хепатит С. Таблица 2 показва броя серологични маркери на HCV инфекция и най-важните области за изпитването им.

    Таблица 2
    Диагностично значение на маркерите на текущата или предишната HCV инфекция

    скрининг
    в услугата
    кръв

    потвърди
    ДЕКЛАРАЦИИ
    резултат
    + анти-HCV

    Една от основните задачи на лабораторната диагностика на хепатит С е диагностика и отделяне на остри от хроничен хепатит С чрез идентифициране на серологични маркери за инфекция. Както при други остри вирусни хепатити, серологичните маркери на HCV инфекцията постоянно се появяват и изчезват по време на инфекцията и процеса на възстановяване (Фигура 2).

    HCV РНК може да бъде открита на 7-ия 21-и ден след HCV инфекция и анти-HCV на ден 20 до 150 (средно на 50-ия ден) [64]. Спектърът на анти-HCV може да се различава в зависимост от периода на остър хепатит. Смята се, че първият за откриване на антитела, кодирани от Core и NS5 от HCV РНК региона. Анти-HCV към протеини, кодирани от зоната NS4, не присъства в острата фаза на хепатит С [65]. Сравнително проучване на нивото на концентрациите на анти-HCV, спектърът на анти-HCV и HCV РНК при пациенти с остър и хроничен хепатит показва някои разлики [66]. Според нас тези различия могат да бъдат свързани с индивидуалните характеристики на инфекциозния процес, което намалява тяхната диагностична стойност.

    Фиг. 2. Остър хепатит С

    По аналогия с лабораторната диагностика на хепатит А и В се очаква за антитела срещу HCV IgM клас ще бъде толкова голям, колкото диагностичната стойност на IgM анти-HAV и IgM анти-НВс. Въпреки това, тези тестови серуми от пациенти с остър и хроничен хепатит С, в присъствието на IgM анти-HCV посочва често тяхното идентифициране между тези пациенти - 50-93% и 50-70%, съответно [67,68], тези резултати показват, че откриването на IgM анти -HCV не може да се използва като маркер на остра HCV инфекция.

    Липсата на маркер, който твърди, че е "златният" стандарт на остър хепатит С, определя необходимостта от цялостна оценка на получените резултати на базата на динамично наблюдение на пациента.

    Също толкова важна област на използване на високо чувствителни методи за тестване на HCV РНК - намаляване на риска от посттрансфузия на хепатит С. Необходимостта от такава работа се определя от наличието на фаза "прозорец", т.е. времето между първото откриване на HCV РНК и появата на анти-HCV, както и наличието на кръвни донори (пациенти с хроничен хепатит С), които имат HCV РНК в отсъствието на анти-HCV. Съвременната система за наличие на тестване HCV проследяване на кръвното включва само анти-HCV, рискът от заразяване с хепатит С се поддържа. Въз основа на това е законно въпросът за изследване на кръвта за наличие на HCV РНК чрез съвременни методи (NAT методите са "тест за усилване на нуклеинова киселина"). Факторът, ограничаващ тази работа, е високата цена на изследванията. За да се намалят разходите, се препоръчва да се тестват кръвните серумни басейни (от 8 до 96 проби) с последващо търсене на положителна проба в случай на откриване на HCV РНК в резервоара на серуми. Като се вземе предвид факторът на разреждане на желаната HCV РНК, когато кръвните серуми се надуват, въпросът за използването на най-чувствителните методи за откриване придобива основна важност. Смята се, че използването на диагностични комплекти за NAT - с чувствителност 50-100 IU / mL може значително да намали риска от посттрансфузионен хепатит С.

    Несъмнено списъкът с въпроси, които могат да бъдат разрешени при тестването на целия спектър от маркери за HCV инфекция, не е ограничен до тези две области. Наличието на съвременни методи за изпитване, съчетано с познаване на техните възможности, разкрива широки перспективи за научни и приложни изследвания на хепатит С.


  • Статии Хепатит