ELISA за вирусен хепатит

Share Tweet Pin it

Оставете коментар 2,929

За откриване на вирусен хепатит в тялото, медицината широко използва метода на ензимния имуноанализ, базиран на откриването на концентрацията и вида на антигените с антитела и ензими. Тя се извършва стъпка по стъпка, чрез лабораторни изследвания, с висока точност на индикациите. В зависимост от количеството и класа на антителата, цветът и концентрацията на ензима, който използва ELISA, се променя и според това лекарят диагностицира заболяването.

Какво представлява ОВОС?

Наличието на вирусен хепатит в тялото на пациента се определя със серологичния метод за изследване на кръвта за наличие на HCV вирус и маркери (тела и антитела), които сочат към него. Свързан имуносорбентен анализ (ELISA) изследва различни вируси, малки молекули, макромолекули, техните количествени и качествени показатели, като се използва експресията на реакция към своите антигени. За да направите това, ензимът се използва като знак за регистрация на сигнала. Той се използва все по-често в медицината, тъй като ELISA ясно намира строго дефинирани антигени, без да ги обърква с другите, има висока чувствителност към наличието на инвазия в вирусния хепатит.

Анализът трябва да се направи на празен стомах.

По-малкото от такава диагноза е невъзможността да се разкрие причината за заболяването, тъй като методът показва само реакцията на имунната система на тялото. Резултатите от анализа се влияят от ваксинацията, проведена по-рано. 8 часа преди анализа се препоръчва да се въздържат от ядене, никотин, алкохол. Основата на теста ELISA е ензимен и имунен отговор на организма към вируса. Биологичните молекули се свързват с клетката и нейните елементи, микроорганизмите, откриват вируса, след това работят с ензими, които позволяват експресирането на имунния отговор в видим и измерим параметър.

Индикации за анализ

Вирусният хепатит в организма може да причини рак и чернодробна цироза. Значението на навременната диагноза е неоспоримо. Основният метод за диагностика е ELISA теста, който точно определя наличието на HCV вирус (IgM и IgG) и активността на неговите микроелементи. Без неуспех се подават тестове за вирусен хепатит:

  1. Хора от рискови групи (наркомани, пациенти със СПИН, медицински персонал и полицейски служители).
  2. Хора с остра или хронична форма на хепатит.
  3. Бременни и планиране на бременни жени.

ELISA разпознава болестта на всеки етап. Резултатите от анализа са средно готови за 2 дни.

Критерии, които определят важността на анализа

ELISA тестът определя наличието на антитела от клас IgG, IgM, IgA. При диагностициране на вирусен хепатит лекарят не обръща внимание на техния тип, тъй като наличието на такова проявление на HCV вируса вече показва остър или хроничен стадий на заболяването. В ранните стадии на заболяването се повишава нивото на IgM (5 дни след заразяването); IgG антителата се появяват на 15-20 дни и могат да бъдат в човешката кръв за дълго време дори след излекуването; IgA - се появява след 10-14 дни, намалява след лечението.

В случай, че IgG и IgA са открити след употреба на лекарства и тяхното ниво остава в същия индекс - носителят има хронична форма на хепатит. Важен критерий за теста ще бъде ясната дефиниция на класа на антителата и техния брой. Въз основа на това може да се знае не само наличието на болестта, но и фазата на неговото развитие. Откриването на такива елементи в кръвта на пациента прави възможно да се предпише правилно и своевременно лечение, за да се предотвратят по-сериозни последици.

Как се провежда?

Изолирайте директно и не директно тест за ELISA. Етапи на пряко:

  1. Събиране на биологичен материал и поставянето му в специални кладенци.
  2. В рамките на 15-30 минути. антигени се прикрепят към повърхността на ямките.
  3. Добавяне на антитела към гнездата към открития антиген. Оставете всичко за 1-5 часа.
  4. Отстраняване на неприкрепени антигени (изливане на съдържанието на кладенците).
  5. Изплакнете кладенците със специално решение.
  6. Добавете ензимен разтвор към ямките. Оставете за 30 минути до 1 час.
  7. Използвайте колориметрия (разкривайки цвета и концентрацията на цвета на съдържанието на кладенеца, сравнение с индикаторите, които са пряко пропорционални на концентрацията на вируса).
Използването за диагностициране на косвения метод ELISA ще даде по-точен резултат.

Непряк метод на ELISA се извършва чрез прилагане на небелязани антитела към откритите антигени и последващо добавяне към тях на белязани. Първо, кръвта се взема от пациента и се носи в дупките за 15-30 минути. (антителата са фиксирани с гнездата). След това в тях се въвеждат небелязани антитела в продължение на 1-5 часа (се образува връзка на антитела с антигени - имунния комплекс). Освен това от сонда не се изливат микроелементи и се измиват със специален разтвор. На следващия етап лабораторният асистент добавя микроелементи към ямките в продължение на 15-30 минути. (в този случай небелязани с белязани за образуване на антитяло-антитяло-антиген комплекс). Премахването на излишъка (насипно) при източване и изплакване с разтвор се премахва отново. След това се въвежда ензим, който променя цвета си в 5-30 минути. останете в дупките и цветните данни се проверяват спрямо данните на табличните индикатори. Индиректният метод за ОВОС е по-точен.

Какво показва ELISA в анализа за вирусен хепатит?

Имуносорбент анализ сочи наличие на инфекция (хепатитни вируси от всички видове, ХИВ, херпес, сифилис, цитомегаловирус, морбили, рубеола, заушка, Епщайн-Бар вирус), маркер за автоимунни заболявания, раковите клетки. Показва увреждане репродуктивна система (промяна в нивото на тестостерон, пролактин, естрадиол и прогестерон), неизправност на щитовидната жлеза, инвазия от хелминти, хламидия. Ефективен за откриване на уреаплазмоза, магарешка кашлица, вирус Dange, вирус на Западен Нил, Borrelia. Списъкът на дефинициите е висок, включва много заглавия.

Потвърждаване на резултатите

Определянето на HCV антигена чрез метода ELISA дава 98% точност. Използва се и за повторно тестване на биологичен материал с размити предишни индекси. Наличието на IgM антигени не е индикатор за остра форма на хепатит и изисква допълнителни изследвания. При повторно извършване на ИФА резултатите от теста съвпадат с 90-100%. В случаи на минимално несъответствие се използва средна стойност като индикатор. За да се постигне максимална точност в показателите, лекарите се препоръчват да провеждат биохимичен кръвен тест паралелно. За да се проверят резултатите след ензимния имуноанализ, могат да се използват други диагностични методи.

Методът ELISA за откриване на хепатит

Съвременната медицина знае много чернодробни заболявания. Сред най-честите и опасни са HCV (вирусен хепатит С), тъй като тази инфекция често се развива асимптоматично и води до критични усложнения до смъртоносен изход. Следователно е от първостепенно значение е да навременна диагноза извършва чрез различни методи заболяване, включително ензимен имуноанализ (EIA) за откриване на антитела в кръвта на вируса.

HCV инфекция за диагностициране на хепатит

При лабораторната диагностика се използват два вида методи за откриване на хепатит С (HCV инфекция):

  1. Серологично, на базата на откриването на антитела срещу вируса на хепатит С (анти-HCV), се нарича ELISA (ензимен имуноанализ). То е предназначено за откриване на анти-HCV (IgM и IgG маркери) се използва за скрининг и диагностициране на хепатит С. И двете от тези маркери могат да бъдат открити в кръвта (плазмата) в различни комбинации, което изисква правилното клинично тълкуване. За да се потвърди наличието на анти-HCV, се провежда RIBA (рекомбинантен имуноблот) тест.
  2. Молекулярно-биологичен, насочен към откриване на РНК вирус. Тестът за HCV РНК се определя в следните категории пациенти:
    • с идентифицирани анти-HCV;
    • без открити анти-HCV, но с установени епидемиологични и клинични данни, изискващи елиминиране на остри форми на HCV.

РНК на вируса може да бъде открита в кръвта 14 дни след инфекцията, т.е. преди появата на анти-HCV, които се появяват през първите 2-3 месеца.

За окончателното потвърждаване на диагнозата (особено, когато се открива само един от двата маркера за HCV инфекция), експертите препоръчват HCV анти-HCV и HCV РНК да се повтарят след определено време.

Идентификация на хепатита чрез ELISA

За ранна диагностика на вирусен хепатит, по-специално асимптоматични, anicteric форми серум се открие наличието на вирусни протеини (антигени) или антитела към него (произведен от имунната система по време на проникването на вируса на тялото) чрез ензимен имуноанализ (EIA). Това е универсален метод за имунологична диагностика, чиято същност е да проучи взаимодействието на "антиген-антитяло". Той се използва широко в много страни по света.

Определяне на HCV по ELISA позволява не само точна диагноза, но също така да се направи оценка на характера на заболяването, както и изберете компетентно и ефективно лечение с конвенционални средства (интерферон, рибавирин), лекарства пряко действие (sofosbuvir, Daklatasvir) и общото им Индия и Китай.

Ако е възможно, диагностицирането на вирусния хепатит чрез ELISA се допълва от PCR (полимеразна верижна реакция), което позволява да се определи наличието на вируси на хепатит в кръвта на РНК.

Колко точен е методът на ензимния имуноанализ

Смята се, че точността на метода на ELISA е 95%, т.е. 95 от 100 пациенти с имуноанализ могат да бъдат открити в присъствието на кръв и количеството HCV антитела - IgM и IgG. Ако резултатът е положителен, може да се диагностицира HCV контакт с тялото (не самият вирус, а наличието на антитела към него в кръвта, което може да е резултат от вече прехвърлената болест).

Все пак, въпреки високата чувствителност на ензимен имуноанализ (EIA), 40% от пациентите с положителен резултат на вируса може да не бъде открит, което показва съмнителни или фалшиви положителни резултати.

За да се потвърди правилността на резултатите от ELISA, RIBA (рекомбинантно имуноблотиране) се използва за по-точно изследване на откриването на антитела срещу HCV.

Антивирусен тест срещу HCV

Ефективните изследвания за определяне на наличието на антитела срещу хепатитни вируси включват анти-HCV ядро, използвано като потвърдителен тест за получаване на "несигурни" резултати.

Ако анти-HCV сърцевината се открие в кръвния серум при разреждане от 1: 1000, много вероятно е да бъде диагностициран положителен резултат, т.е. болестта е налице.

Ако пробите при разреждане 1: 1000 са отрицателни, в разреждането 1: 200 са положителни, необходимо е проучване за наличието на вирусна РНК. В този случай най-вероятно няма HCV инфекция.

Важно е да се разбере, че при хронични форми на HCV антитела се откриват непрекъснато и при елиминиране (отделяне на клетки) вирус продължи за 4-8 години или повече. Поради наличието на анти-HCV, не винаги е показателно за инфекция с един организъм и не позволява обективни заключения за дейността protsessa.Dlya получат точни данни за количеството на вируса, от степента на увреждане на черния дроб, продължителност инфекция, както и разликите на остри и хронични форми на заболяването, се препоръчва да се използва определението на спектъра на антитела към различни HCV пептиди. Също така е важно да се наблюдава тяхната количествена и качествена динамика.

Изследвания върху вируса на хепатит В (ELISA и PCR)

"S" антигенът на вируса на хепатит В (HBsAg)

Повърхностният антиген на хепатит В в серума нормално отсъства.
Откриването на повърхностния антиген (HBsAg) на хепатит В в серума потвърждава остра или хронична инфекция с вируса на хепатит В.

В остро заболяване HBsAg открива в серума в последния 1-2 седмици инкубационния период, и първите 2-3 седмици от клинично период. Циркулацията на HBsAg в кръвта може да бъде ограничена до няколко дни, затова е необходимо да се потърси ранен първичен преглед на пациентите. Методът ELISA позволява да се открие HBsAg при повече от 90% от пациентите. Почти 5% от пациентите с най-чувствителните методи изследвания не откриват HBsAg, в такива случаи етиологията на вирусен хепатит В потвърждава от наличието на анти-HBsAg JgM или PCR.

Серумна концентрация на HBsAg във всички форми на височината на хепатит В тежестта на заболяването има значителен обхват на вариант, обаче, има някои редовността на остър период съществува обратна връзка между концентрацията на HBsAg в серума и тежестта на заболяването.

Високата концентрация на HBsAg е по-често срещана при леки и умерени форми на заболяването. При тежки и злокачествени форми концентрацията на HBsAg в кръвта често е ниска, а при 20% от пациентите с тежка форма и при 30% от злокачествения антиген в кръвта изобщо не може да бъде открита. Появата на този фон при пациенти с антитела срещу HBsAg се счита за неблагоприятен диагностичен признак; то се определя при злокачествени форми на хепатит В.

При остър хепатит В концентрацията на HBsAg в кръвта постепенно намалява, докато антигенът изчезне напълно. HBsAg изчезва при повечето пациенти в рамките на 3 месеца от началото на остра инфекция.

Намаляването на концентрацията на HBsAg с повече от 50% до края на 3-тата седмица на острия период по правило показва близък край на инфекциозния процес. Обикновено при пациенти с висока концентрация на HBsAg на височината на заболяването се открива в кръвта в продължение на няколко месеца.
При пациенти с ниска концентрация, HBsAg изчезва много по-рано (понякога няколко дни след началото на заболяването). По принцип, периодът на откриване на HBsAg варира от няколко дни до 4-5 месеца. Максималният период на откриване на HBsAg в гладкия ход на остър хепатит В не надвишава 6 месеца от началото на заболяването.

HBsAg може да бъде открит при практически здрави хора, обикновено с превантивни или случайни изследвания. В такива случаи, да изследва други маркери на вируса на хепатит В - HBsAg анти JgM, анти-HBsAg JgG, анти HBeAg и проучване на функцията на черния дроб.

Ако резултатите са отрицателни, са необходими многократни изследвания на HBsAg.
Ако повторните кръвни изследвания за повече от 3 месеца разкрият HBsAg, този пациент се нарича хроничен пациент с вирусен хепатит В.
Наличието на HBsAg е често срещано. В света има повече от 300 милиона превозвачи, а в нашата страна - около 10 милиона превозвачи.
Прекратяването на циркулацията на HBsAg, последвано от сероконверсия (образуването на анти-HBs), винаги показва възстановяване - възстановяване на тялото.

Кръвен тест за наличието на HBsAg се използва за следните цели:

  • за диагностициране на остър хепатит В:
    • инкубационен период;
    • остър период на заболяването;
    • ранен стадий на възстановяване;
  • за диагностициране на хроничен вирусен хепатит В;
  • с болести:
    • персистиращ хроничен хепатит;
    • цироза на черния дроб;
  • за скрининг и идентифициране на пациентите в риск:

  • пациенти с чести кръвопреливания;
  • пациенти с хронична бъбречна недостатъчност;
  • пациенти с множествена хемодиализа;
  • пациенти с имунодефицитни състояния, включително СПИН.
  • Оценка на резултатите от изследванията

    Резултатите от изследването са изразени качествено - положителни или отрицателни. Отрицателният резултат от изследването показва липса на HBsAg в серума. Положителен резултат - откриването на HBsAg показва инкубация или остър период на остър вирусен хепатит В, както и хроничен вирусен хепатит В.

    Антитела към ядрения антиген на вируса на хепатит B JgG (анти-HBcAg JgG)

    В нормата анти-HBcAg JgG отсъства в серума.
    При пациенти с анти-HBcAg, JgG се появяват в острия период на вирусен хепатит В и продължават да съществуват през целия живот. Анти-HBcAg JgG е водещият маркер на прехвърления HBV.

    Кръвният тест за наличието на анти-HBcAg JgG се използва за диагностициране:

  • хроничен вирусен хепатит В в присъствието на антиген на HBs в серума;
  • прехвърлен вирус на хепатит В.
  • Оценка на резултатите от изследванията

    Резултатът от изследването се изразява качествено - положително или отрицателно. Отрицателният резултат от изследването показва липсата на анти-HBcAg JgG в серума. Положителен резултат - откриването на анти-HBcAg JgG показва остра инфекция, възстановяване или по-рано прехвърлен вирусен хепатит В.

    Антиген "е" на вируса на хепатит В (HBeAg)

    В нормата HBeAg отсъства в серума.
    HBeAg може да бъде открит в серума на повечето пациенти с остър вирусен хепатит В. Той обикновено изчезва в кръвта преди антиген на HBs. Високото ниво на HBeAg през първите седмици от заболяването или откриването му за повече от 8 седмици дава основание да се подозира, че има хронична инфекция.

    Този антиген често се среща в хроничен активен хепатит на вирусна етиология. Особен интерес от определянето на HBeAg се дължи на факта, че откриването му характеризира активната репликативна фаза на инфекциозния процес. Установено е, че високи концентрации на HBeAg съответстват на висока активност на ДНК полимераза и характеризират активната репликация на вируса.

    Наличието на HBeAg в кръвта свидетелства за неговата висока инфекциозност, т.е. наличие в тялото на тестваната активна инфекция на хепатит В и се открива само в присъствието на антиген на HBs в кръвта. При пациенти с хроничен активен хепатит антивирусните лекарства се използват само когато в кръвта се открие HBeAg. HBeAg - антигенът е маркер на острата фаза и репликация на вируса на хепатит В.

    Кръв тест за наличие на HBe антиген се използва за диагностициране:

  • инкубационен период на вирусен хепатит В;
  • продромен период на вирусен хепатит В;
  • остър период на вирусен хепатит В;
  • хроничен персистиращ вирусен хепатит В.
  • Оценка на резултатите от изследванията

    Резултатът от изследването се изразява качествено - положително или отрицателно. Отрицателният резултат от изследването показва липса на HBeAg в серума. Положителен резултат - откриването на HBeAg показва инкубация или остър период на остър вирусен хепатит В или продължително репликиране на вируса и инфекциозност на пациента.

    Антитела към антиген "е" на вируса на хепатит В (анти-HBeAg)

    Анти-HBeAg в серума обикновено липсва. Появата на анти-HBeAg антитела обикновено показва интензивна екскреция на вируса на хепатит В от тялото и лека инфекция на пациента.

    Тези антитела се появяват в остър период и продължават до 5 години след инфекцията. При хроничен персистиращ хепатит анти-HBeAg се открива в кръвта на пациента заедно с HBsAg. Сероконверсия, т.е. преход към анти-HBeAg NVeAg, хроничен активен хепатит, повече prognostically благоприятно, но същото сероконверсията в тежка цироза трансформация на черния дроб не подобрява прогнозата.

    Изследването на кръвта за наличие на анти-HBeAg се използва в следните случаи при диагностицирането на вирусен хепатит В:

  • установяване на началния стадий на заболяването;
  • остър период на инфекция;
  • ранен стадий на възстановяване;
  • възстановяване след боледуване;
  • късен етап от оздравяването.
  • диагностика на наскоро предаван вирус на хепатит В;
  • диагностика на хроничен персистиращ вирусен хепатит В.
  • Оценка на резултатите от изследванията

    Резултатът от изследването се изразява качествено - положително или отрицателно. Отрицателен резултат от изследването показва липсата на антитела срещу HBeAg в серума. Положителните резултати - откриване на антитела срещу HBeAg, което може да показва по-ранен етап на остър вирусен хепатит, остър период инфекция, ранните етапи на възстановяване, възстановяване, наскоро мигрирали вирусен хепатит В или персистираща вирусен хепатит В.

    Критериите за наличие на хроничен хепатит В са:

  • откриване или периодично откриване на HBV ДНК в кръвта;
  • постоянно или периодично повишаване на ALT / AST активността в кръвта;
  • морфологични признаци на хроничен хепатит при хистологичното изследване на чернодробната биопсия.
  • Откриване на вируса на хепатит В чрез PCR (качествено)

    Вирусът на хепатит В в кръвта обикновено отсъства.
    Качественото дефиниране на вируса на хепатит В чрез PCR в кръвта позволява да се потвърди наличието на вируса в тялото на пациента и по този начин да се установи етиологията на заболяването.

    Това проучване предоставя полезна информация за диагностицирането на остър вирусен хепатит В при инкубацията и ранното развитие на заболяването, когато основните серологични маркери в кръвта на пациента може да отсъстват. Вирусната ДНК в серума се открива при 50% от пациентите в отсъствието на HBeAg. Аналитичната чувствителност на PCR метода е не по-малка от 80 вирусни частици в 5 μl, за която е открита ДНК проба, специфичност - 98%.

    Този метод е важен за диагностицирането и мониторинга на хроничната HBV. Приблизително 5-10% от чернодробна цироза и други хронични чернодробни заболявания, дължащи се на хроничен превоз на хепатит В вирусни маркери активност на такива заболявания е наличието на HBeAg и HBV ДНК в кръвта.

    Методът на PCR позволява да се определи ДНК на вируса на хепатит В в кръвта както качествено, така и количествено. Откриваемият фрагмент и в двата случая е уникалната ДНК последователност на гена на структурния протеин на вируса на хепатит В.

    Откриването на ДНК на вируса на хепатит В в биоматериал с помощта на PCR е необходимо за:

  • разрешаване на съмнителни резултати от серологични изследвания;
  • откриването на острия стадий на заболяването в сравнение с предадената инфекция или контакт;
  • мониторинг на ефективността на антивирусното лечение.
  • Изчезването на ДНК от вируса на хепатит В от кръвта - знак за ефективността на терапията

    Откриване на вируса на хепатит В чрез PCR (количествено)

    Този метод предоставя важна информация за интензивността на заболяването, ефективността на лечението и развитието на резистентност към активните лекарства.
    За диагностика на вирусен хепатит чрез PCR в серума на системата за изпитване, чувствителността на която е 50-100 копия на проба, което позволява откриване на вируса при концентрация от 5 х 10 ^ 3 ^ 4 -10 копия / мл. PCR за вирусен хепатит В със сигурност е необходимо за преценка за вирусна репликация.

    Вирусната ДНК в серума се открива при 50% от пациентите в отсъствието на HBeAg. Материалът за откриване на ДНК на вируса на хепатит В може да бъде серум, лимфоцити, хепатобиотици.

    • Оценката на нивото на виремия се извършва, както следва:
    • по-малко от 2,10 ^ 5 копия / ml (по-малко от 2,10 ^ 5 IU / ml) - ниска виремия;
    • от 2,10-5 копия / ml (2,10-5 IU / ml) до 2,10 ^ 6 копия / ml (8,10 ^ 5 IU / ml) - средната виремия;
    • повече от 2.10 ^ 6 копия / ml - висока виремия.

    Съществува връзка между резултата от острия вирусен хепатит В и концентрацията на HBV ДНК в кръвта на пациента. При ниски нива на процес виремия хронична инфекция е близо до нула, с средната - процес chronization се наблюдава в 25-30% от пациентите, но с високо ниво на виремия в остър вирусен хепатит често става хронична.

    Показания за лечение на хроничен HBV с интерферон-алфа да се считат присъствието на активна вирусна репликация маркери (откриване на HBsAg, HBeAg и ДНК в серума HBV в рамките на последните 6 месеца.).

    Резултат мерки служат изчезване на HBeAg и HBV DNA в кръвта, което обикновено е съпроводено с нормализиране на нивата на трансаминазите и дългосрочна ремисия на заболяването, HBV DNA изчезва от кръвта на пети месец от лечението при 60%, до деветия месец - 80% от пациентите. Намаляването на нивото на виремия от 85% или повече на третия ден от началото на лечението, в сравнение с изходното ниво е достатъчно бърз и точен критерий за прогнозиране на ефективността на терапията.

    EIA за хепатит С

    IFA хепатит С определя ефективно, това е един от методите за диагностициране на заболяването въз основа на взаимодействието на антигени и антитела. Имунохимичната реакция чрез ELISA (ензимен имуноанализ) позволява откриването на анти-HCV антитела в тялото. Методът дава възможност да се диагностицира човешкия хепатит С по различен начин, да се определи етапът на развитие на болестта, да се предскаже неговият курс. Откриването на специфични серологични маркери също позволява избор на ефективно антивирусно лечение на патологията.

    Характеристики на метода

    Анализ за откриване на антитела срещу вируса на хепатит тип С в човешката кръв се извършва чрез прикрепяне на извънземния микроорганизъм (антиген) към имуноглобулиновата молекула. Прикрепеният ензим ензим играе ролята на отличителен етикет. Тя позволява да се следва имунохимичната реакция, както и един от нейните компоненти.

    Като компоненти на ензимния имуноанализ, следните могат да действат:

    • антитела;
    • антитела, маркирани със специален ензим;
    • антигени;
    • субстрати на ензими;
    • индикаторни багрила.

    Когато чужди вредни микроорганизми навлизат в човешкото тяло, защитните сили започват да произвеждат имуноглобулини (антитела). След това те действат върху антигените и ги неутрализират. Такова взаимодействие води до образуването на антитяло-антиген, което има своите показатели за количество и качество. Те показват наличието или липсата на HCV инфекция в организма. В случай, че резултатът от ензимния имуноанализ е положителен, се появява хепатит тип С вирус.

    Съвременните технологии в медицината могат значително да съкратят времевата рамка за откриване на вируса на хепатит, който се появява в остра форма. Благодарение на диагностичните системи от трето поколение също изглежда възможно да се увеличи специфичността и чувствителността на имунохимичната реакция.

    Основният учебен материал за IFA е венозна кръв (включително донорна кръв). Според показанията може да се отнеме цереброспиналната течност или амниотичната течност.

    Положителният резултат от метода ELISA за хепатит тип С не винаги показва наличието на вирусна инфекция в организма. В повече от 35% от случаите не се откриват вирусни антигени в кръвта, което води до фалшив положителен резултат.

    Методът ви позволява да наблюдавате количествените и качествените промени, като разграничавате остри и хронични форми на хепатит С. За да се определи активността на патологичния процес, обаче, той е неефективен. За да се потвърди по-точно наличието на HCV инфекция, трябва да се използват и други методи за диагностика на патологията.

    Индикации за ОВОС

    Методът за откриване на видовете и количествената концентрация на чужди микроорганизми (антигени) с помощта на имуноглобулини и ензими се извършва на няколко етапа. Въз основа на промяната на цвета и количествения индекс на ензима, лекарят може да диагностицира човек с хепатит тип С.

    Следните категории хора са по-склонни да се разболеят:

    1. Пациенти, подложени на операция, както и заболявания на вътрешните органи и системи.
    2. HIV-инфектирани (заразени с вируса на човешката имунна недостатъчност). Голяма част от хората в тази група са наркомани.
    3. Медицински работници.
    4. Служители на правоприлагащите органи.
    5. Бременни жени.

    Хепатитът с вирусен произход често води до развитие на рак (например рак на черния дроб). Ето защо, за да дарят кръв в имуноензимен анализ трябва първо хора, които влизат в основната рискова група, както и пациенти с остър или хроничен хепатит.

    Според указанията лекарят може да предпише ELISA на пациенти, при които има диагноза:

    • ППИ (инфекции, предавани по полов път);
    • заболявания с вирусен произход (папиломавирус, херпесна инфекция, хепатит и др.);
    • алергичен характер на патологията;
    • състояние на имунната недостатъчност;
    • онкология.

    Предимства и недостатъци

    IFA хепатит С може да бъде открит на ранен етап, както и в асимптоматични и жълтеница форми. Както всеки диагностичен метод, той има редица предимства и недостатъци.

    Сред положителните характеристики на ELISA експертите идентифицират:

    1. Точност на качествените и количествените показатели. Чувствителността на метода надвишава други проучвания за откриване на хепатит десетина пъти.
    2. Значително намаляване на времето за откриване на вирусна инфекция чрез модерни диагностични системи.
    3. Ниска цена в сравнение с други изследвания за откриване на хепатит при хора.
    4. Възможността за диагностициране на чернодробно заболяване в ранен стадий при отсъствие на тежки симптоми.
    5. Изследвания стъпка по стъпка, използващи автоматизирани процеси.

    Въпреки високата точност на ELISA, повече от 35% от случаите с положителен резултат от хепатитния вирус при пациента не се откриват. Често тестът не потвърждава патологията, което показва съмнителен или отрицателен резултат.

    Достоверността на изследването засяга до една или друга степен:

    1. Приемане на лекарства.
    2. Нарушения на метаболитните процеси в тялото.
    3. Наличието на някои патологии с хронична природа, които насърчават активното производство на имуноглобулини.

    Като се имат предвид недостатъците на резултатите от опита in vitro с метода ELISA, се правят допълнителни изследвания на пациента. За надеждно откриване на антитела към метод вирусна инфекция на хепатит С се използва PCR (полимеразна верижна реакция) или RIBA (Рекомбинантен имуноблот).

    Какво идентифицира и как се провежда изследването

    Анализът чрез ELISA може да разкрие широк спектър от заболявания при хората.

    В допълнение към откриването на антитела от хепатит от всякакъв вид, положителен резултат от теста може да показва наличието на следните патологии в тялото:

    • вирус на човешка имунна недостатъчност;
    • херпесна инфекция;
    • сифилис;
    • СПИ (уреаплазмоза, хламидия и др.);
    • HPV;
    • цитомегаловирус.

    Изследвания е също един вид маркер за откриване на злокачествени неоплазми, патологии на генетични, хормонални нарушения, както и повреди в ендокринната система.

    Подготовката за доставяне на биологичен материал за откриване на вируса на хепатит С предполага отказът да се приема храна и лекарства 12 часа преди изследването. Също така предпоставка е въздържането от пиене на алкохол, мазнини, пържени и солени храни.

    ELISA пряк метод

    Основните стъпки в провеждането на директно тестване са, както следва:

    1. Първоначално лабораторният работник извлича кръв от вената (или друг биологичен материал) и след това я поставя в специални контейнери.
    2. Извънземните микроорганизми (антигени) започват да се прикрепят към тях в рамките на 20 минути.
    3. Специалистът добавя имуноглобулини (антитела) към откритите антигени, за да образува имунен отговор. В този случай компонентите остават няколко часа.
    4. Несвързаните антигени се отстраняват чрез изливане на съдържанието от контейнерите.
    5. Материалът се изплаква с разтвора и след това се обработва с ензими и се оставя за един час.
    6. Цветът и концентрацията на съдържанието се анализират чрез използване на колориметрия.

    Ако количественият индекс на съдържанието надвишава допустимите стандарти, това показва наличието на вируса на хепатит С в човешкото тяло.

    Непряк метод ELISA

    Това предполага взаимодействие на небелязани имуноглобулини с антигени, към които са прикрепени последователно маркирани антитела.

    В началото пациентът взема кръв от вената. След това биологичният материал се поставя в специални контейнери за около половин час. В това небелязани антитела са прикрепени към стените на резервоарите. След това към тях се добавят маркирани антитела. В резултат на тяхното взаимодействие се образува имунният комплекс "антитяло-антиген".

    След 4 часа съдържанието на контейнерите се излива и неприкачените микроелементи се отстраняват. Лабораторният асистент прибавя маркираните антитела към вече образувания комплекс с имунната реакция "антитяло-антитяло-антиген".

    След многократно отстраняване на свободните микроелементи, към съда се добавя специален ензим, променяйки цвета и количествените индекси на съдържанието. Въз основа на получения резултат експертът проверява данните и прави заключение.

    Обяснение на резултатите

    При извършване на ELISA се обръща внимание на наличието или отсъствието на антитела от класове IgA, IgG и IgM. Количествените индекси на тези антитела се сравняват с данните от специална таблица.

    Според нея тълкуването на резултатите е следното:

    1. Ако не са определени и трите типа показатели, човекът е напълно възстановен.
    2. При едновременно положителен резултат и за трите показателя се наблюдава остра форма на вирусна инфекция.
    3. Ако се определят антитела от класа IgG, като останалите класове не се открият, тогава лицето развива постоинфекциозен имунитет.
    4. Хроничният характер на заболяването е показан от положителните индекси на антитела от класове IgG и IgA. Те обаче остават непроменени дори след лечение с наркотици.
    5. При положително откриване на трите типа антитела може да има рецидив на хроничната природа на хепатита.

    Според статистическите данни нивото на IgM започва да се повишава в рамките на няколко дни след като инфекцията навлезе в тялото, което показва ранен етап на патологията. IgG антителата обикновено се появяват 2 седмици след началото на заболяването и са в кръвта за дълъг период от време (дори след възстановяване). IgA антителата се откриват след 2 седмици, докато след лекарствената терапия концентрацията им в организма намалява.

    Не забравяйте, че положителната за ELISA хепатит C не винаги показва инфекция. Често тестът се смята за фалшиво положителен, което изисква повторно даряване на кръв. В някои случаи пациентът получава допълнителни изследвания, за да определи по-точно кръвната картина.

    Основният критерий за теста е точното определяне на количествените и типичните показатели. Те ви позволяват да определите не само наличието на вируса, но и формата на болестта. Диагностиката на хепатит С с помощта на съвременни методи ще позволи да се започне навременна медицинска терапия и да се сведат до минимум негативните последици.

    Диагностика на хепатита

    Диагнозата започва с преглед на пациента. За правилната и своевременна диагностика на "вирусен хепатит", лекарите първо преглеждат пациента, изпращат го за кръвни изследвания и тестове за урина.

    На първо място, те обръщат внимание на такива характерни за началния период на симптомите на болестта, като летаргия, обща слабост на мускулите, загуба на апетит, гадене, стомашен дискомфорт, потъмняване на урината, повишаване на черния дроб и печат, засилваща се болка, чувствителност на долния ръб. Общата анализ на кръв, лекарите обръщат внимание на съдържанието на бели кръвни клетки, лимфоцити, скоростта на утаяване на еритроцитите.

    Те прибягват до биохимични тестове за кръв и урина, за да оценят степента на увреждане на черния дроб и да потвърдят дали жълтеницата е свързана с възпаление на черния дроб. Най-показателно е нивото на жлъчния пигмент - билирубин, образуван в черния дроб в резултат на разрушаването на червените кръвни клетки.

    Обикновено, билирубинът се свързва с протеини в кръвта и няма токсичен ефект върху тъканите на тялото. При хепатита концентрацията на свободния и свързан билирубин в кръвта се повишава рязко. Когато надвишава 200-400 mg / l, жълтеницата се вижда от окото.

    Говори се за увреждането на хепатоцитите, че нарастващото ниво на трансаминазна активност - А1АТ и AsAT, които влизат в кръвта от чернодробните клетки през увредените мембрани. Съществуват и специални тестове за състоянието на системата за коагулация на кръвта, в която участват протеините, синтезирани в черния дроб. Диагностичната стойност има положителна реакция на уровина към направилилин.

    Доказателство за нарушение на черния дроб, е индикатор - тимолна проба. Промяната в протромбиновия индекс характеризира тежестта на курса на вирусния хепатит, а повишаването на активността на алкалната фосфатаза, общото количество на билирубина, показва нарушение на секреторната функция на черния дроб. Реакцията на урината с жлъчните пигменти в началото на заболяването е положителна много по-рядко.

    При диагностицирането на малка важност, остри и хронични форми на вирусен хепатит отстраняват ултразвукова проверка на коремната кухина. Използвайки този метод, лекарите могат да идентифицират такива промени не се открива при външния оглед: увеличение на черния дроб, свиване на чернодробните вени, уплътняване и удебеляване на стените, признаци на възпаление на жлъчния мехур и панкреаса, разширяване на портал и слезката вена, спленомегалия, лимфаденопатия, Най-важният метод за диагностициране, по-специално хроничен хепатит, е чернодробната биопсия.

    Методите за откриване на антитела и антигени в кръвта и други телесни течности включват серологична диагноза. За ранна диагностика на вирусен хепатит, включително anicteric, асимптоматични форми серумния откриване наличието на вирусни протеини (антигени, известни също като маркери на вирусен хепатит), или техни антитела чрез immupofermentnogo анализ (ELISA). В допълнение, IFA евентуално допълнен с полимеразна верижна реакция (PCR), която позволява да се определи наличието на серум вирусната нуклеинова киселина - ДНК на вируса на хепатит В, хепатит РНК вируси и други, което е особено важно за стартиране в началото на лечението.

    Имуноензимен анализ (ELISA) е универсален метод за имунологична диагностика, който се използва широко на практика. Той е предназначен за откриване на вирусни протеини (антигени) или антитела, които се произвеждат от имунната система в отговор на проникването на вируси в човешкото тяло. Тези протеини са вид маркери или признаци, чието наличие ви позволява да направите точна диагноза, да оцените естеството на заболяването, да помогнете на лекуващия лекар да избере правилното лечение. Този метод се основава на известното взаимодействие на "антиген-антитяло".

    За да се определят антигените, различни търговски фирми освобождават тестови системи, които са 96-ямкови полистиренови плочи. На дъното на гнездата антителата срещу един или друг антиген на патогена, например към повърхностния антиген на вируса на хепатит В - антигена на HBs, се сорбват ("шият").

    В първия етап към всяка ямка се прибавя проба, например серумът на кръвта на пациента в различни разреждания, съдържащ все още неопределен вирусен протеин (антиген). Ако този протеин (антиген) "научи" своето антитяло, тогава се свързва тяхното свързване. Това означава, че серумът на пациента съдържа този антиген, антителата, които се сорбират на дъното на плаката.

    За да се видят резултатите от тази реакция, има следваща стъпка, при която към комплекса "антиген-антитяло" се прибавя съединение, което се свързва с антитялото. Това съединение съдържа ензим, например пероксидаза от хрян. Когато към него се добави субстрат, последният се разцепи, последван от жълто-кафяв разтвор.

    В следващия етап всяка ямка се измива старателно от нереагирали компоненти. В тези ямки, където антигенът, както в нашия случай, е напълно свързан с антитялото, той вече не може да взаимодейства със добавеното съединение.

    Следователно, той се отстранява от кладенеца по време на измиването. Тъй като серумът се разрежда, съдържанието на антитела в него намалява и те вече не могат напълно да свързват антигена. В тези ямки съединението, съдържащо ензима, се свързва с антигена и остава в ямката след измиване. В следващата стъпка, субстрата се добавя и резултатите от реакцията се наблюдават, които се оценяват визуално или със спектрофотометър.

    По този начин открихме, че в серумната проба от пациента се съдържа HBs-антиген. Можете също така да откриете количеството или титъра, определящ последното разреждане на серума, където се е появил жълтият цвят. Колкото по-голяма е степента на разреждане, толкова повече вирусът се съдържа в кръвта на пациента.

    По подобен начин може да се определи наличието на антитела към един или друг причинител на вирусен хепатит. Само в тези случаи диагностичните тестови системи се използват с "пришити" до дъното на ямките, не с антитела, а с известни антигени. Предимствата на този метод са висока чувствителност и специфичност, простота при формулирането на реакцията, възможност за едновременно проучване на голям брой пациенти. Сред недостатъците на метода може да се отбележи нуждата от специално скъпо оборудване и подходящи умения на персонала.

    Методът на полимеразната верижна реакция

    В съвременната лабораторна диагностика PCR има специално място. PCR се повишава клинична лабораторна диагностика па коренно различна височина - нивото на нуклеинови киселини (ДНК и РНК), която позволява директно откриване на инфекциозен агент или генетична мутация в всяка биологична среда.

    По този начин, една кандидат молекула нуклеинова киселина може теоретично да бъде открита сред милиони други. От гледна точка на клиничната медицина определянето на нуклеиновата киселина е еквивалентно на откриването на патогена в предмета на изследването.

    От биологията е известно, че нуклеиновите киселини (ДНК или РНК) притежават свойството на самовъзпроизвеждане (възпроизвеждане). Този принцип е в основата на PCR метода, когато този процес се извършва изкуствено в лабораторията. За да направите това, нуклеиновата киселина се изолира първо от болна тъкан (например, в случай на предполагаем вирусен хепатит).

    Той изпълнява ролята на един вид "матрица", върху която се осъществява синтеза. Нуклеиновата киселина има своя "отпечатък" - уникална последователност от нуклеотиди, от която се състои. За всеки патоген е изследвана такава последователност, е съставена оригинална "карта".

    Най-важният елемент в PCR Това е праймер (къси секции от ДНК, допълващи се към (съответстващи) на областите на нуклеиновата киселина, изолирани от пробата). Праймерите осигуряват задействането и специфичността на реакцията.

    По този начин, системата за тестване на PCR се състои от смес от нуклеинови киселини на тестовата проба, праймера и специалните ензими (полимерази), чрез които тази реакция е невъзможна. PCR анализът включва няколко цикъла (етапи), които водят до реплики на разпознаваемата част от матричната нуклеинова киселина. Тези цикли се повтарят 30-50 пъти в съответствие с определената програма. Крайният продукт от тази реакция се разпознава чрез гелна електрофореза.

    Индикаторът за "чувствителност"

    Един от най-важните критерии за диагностичната ефективност на всеки лабораторен анализ е показателят "чувствителност". В този случай е необходимо да се направи разграничение между аналитичната и диагностичната чувствителност. Аналитична чувствителност по отношение на PCR е минималният брой копия на ДНК или РНК в 1 ml от разтвора на пробата, което може да се определи чрез тази система за тестване.

    Повечето търговски системи за тестване могат да открият желаната нуклеинова киселина в биологичната проба, дори ако нейната концентрация е няколкостотин копия в 1 ml от пробата. Това включва обща разпоредба, която определя клиничната пригодност на лабораторни диагностични методи или системи за изпитване - диагностичната чувствителност на метода не трябва да бъде по-ниска от 95-98%.

    Вторият универсален критерий за лабораторна ефективност е "специфичността", която се определя от процента здрави хора, които имат наистина негативни резултати от анализа. Методът на PCR има най-висока специфичност, която достига 99-100%.

    Диагностичната чувствителност и специфичността на PCR са съпоставими и често надвишават тези, предоставени от други методи, които са "златният стандарт" при диагностицирането на инфекциозни заболявания.

    Резултатите от PCR анализа могат да бъдат получени в рамките на един работен ден, като пробите, събрани за анализ, се съхраняват (натрупват) дори и за няколко седмици, подлежащи на подходящи температурни стандарти. Неотдавнашна оценка на чувствителността на различни диагностични методи, проведена неотдавна в няколко чуждестранни изследователски центъра, показа, че ELISA има чувствителност 50-70%, а PCR - от 90 до 100%.

    PCR, в сравнение с ELISA и други методи, има две важни предимства: висока чувствителност и кратък анализ на времето, т.е. "актуалност" за получаване на резултата от изследването от лекаря и пациента.

    Преди други методи на клинична лабораторна диагностика, има предимства на PCR:

    - методът позволява да се открие всяка ДНК и РНК дори и в случаите, когато е невъзможно да се направи това с други средства;

    - методът има висока специфичност (до 100%). Това се дължи на факта, че в "изследваните материали се идентифицира уникален фрагмент от нуклеинова киселина, който е характерен само за причинителя или гена;

    - възможността за провеждане не само на качествена (наличност), но и на количествена (концентрация) оценка на съдържанието на нуклеинова киселина. Понастоящем, използвайки системи за търговски тестове, в изследваната проба може да се определи няколкостотин копия;

    - висока адаптивност и автоматизация на метода позволяват на лекаря да получи резултатите от изследването и да запознае пациента с тях в деня на анализа;

    - PCR позволява идентифицирането на патогена в организма още преди появата на болестта, например, в инкубационния период;

    - за PCR- минимален обем проба за анализ (до няколко микролитра) е достатъчен;

    - PCR анализ позволява едновременно диагностициране на няколко патогени в една проба без да се компрометира чувствителността или специфичността на резултата;

    - резултатите от PCR могат да бъдат въведени в носители на компютърни данни или фотографирани за по-нататъшна оценка от независими експерти.

    Въпреки горепосочените предимства, PCR методът все още не е лишен от някои недостатъци, които трябва да бъдат взети предвид при оценката на резултатите от изследването:

    - най-високите изисквания за оборудването на лабораторията, качеството на системите за изпитване и стриктното спазване на правилата за изследване, за да се избегне получаването на неверни резултати. Решаването на проблема за качеството на анализите е възможно с подходяща квалификация на персонала и задължително сертифициране на лабораторията;

    - двусмислена оценка на положителния PCR резултат. Този факт често е неоснователен аргумент от практикуващите, че се съмняват в резултата и ефективността на метода на PCR. Например, при индивиди с ДНК от патогена, открит в кръвта чрез PCR метода, болестта не може да се развие клинично.

    При тази ситуация, когато се прави оценка на PCR анализа, трябва да се говори за заразен пациент, а не за развитието на инфекциозна болест. Методът на PCR анализ позволява да се определи присъствието или отсъствието на патогени, до голяма степен отговаря на въпроса за "лечение на нелекувани", а също дава възможност да се оцени качеството на лечението чрез наблюдение на присъствието или отсъствието на патогена. Лекарят, оценяващ резултата от PCR анализа, осъзнава, че този резултат не е единственият аргумент при вземането на решение дали да започне лечение или да го откаже.

    За всеки вид, причинителят на вирусен хепатит А тестова система, но най-ценен метод PCR оказа диагностициране на вирусен хепатит В, С, D, G. PCR метод е от решаващо значение за диагностициране на хепатит В. Това се дължи на факта, че сред много разновидности на вируса има мутант (с променени признаци), които не се определят от конвенционалните серологични тестове.

    Методът на PCR анализ позволява да се разкрие и в каква форма се намира вирусът на хепатит 15, дали той е способен на независимо възпроизвеждане или интегриран (вграден) в ДНК на клетката гостоприемник. Това е изключително важно клинично значение, тъй като интегративен формата на тази инфекция човек не е заразно за другите (сигурност за сексуалния партньор, професионална пригодност, че не съществува риск от вертикално предаване от майка на плода, и така нататък. Н.).

    В допълнение, на такива пациенти не е показана антивирусна терапия, освен това - това е дори опасно. В същото време, с интегриращата форма на инфекция, вероятността от развитие на рак на черния дроб нараства рязко (повече от 200 пъти). Такива хора трябва да преминават най-малко веднъж годишно цялостен клиничен и лабораторен и инструментален преглед.

    Методът на PCR може да действа като арбитър за определяне на необходимостта от иницииране на лечението и наблюдение на неговата ефективност. Бързото изчезване на хепатит В ДНК от кръвта е пряко и надеждно изследване на успешния изход от антивирусното лечение.

    По този начин, определяне на HBV ДНК в плазмата е важен анализ, който в комбинация с други лабораторни тестове позволява обективно диагностициране на инфекция, се определи естеството на процеса на инфекцията, за да действа като критерий в терапията и оценка на неговата ефективност.

    PCR метод-анализ няма равен на диагноза, прогноза и оценка на успеха на антивирусна терапия на инфекции, причинени от хепатит С използването на PCR може да открие вируса на хепатит С в ранен стадий на инфекция, като HCV РНК може да бъде открит в серума в една седмица след инфекция. С помощта на този метод се определят генетичните варианти на този вирус, които позволяват на лекаря да предпише правилното лечение.

    В случай на вирусен хепатит D PCR анализът позволява определяне на вирусна РНК в кръвния серум на пациента, както и смесена хепатит B и D инфекция. Следователно, този метод на изследване може да се използва за наблюдение на ефективността на лечението, прогнозата на курса и изхода от заболяването. Важно е лекарят да определи дали има смесена инфекция, тъй като хепатит D увеличава некротичния ефект при хепатит В и следователно увеличава риска от неговото развитие.

    Методът на PCR понастоящем е единственият начин да се докаже наличието на инфекция с вируса на хепатит С.

    Обмислете използването на диагностични методи за различен хепатит

    Хепатит Е. Основните диагностични признаци на вирус на хепатит Е са предположение механизъм воден предаване, възрастта на пациента, от 20 до 40 години, разпространение в регионите най-вече в тропическите и субтропически зона, клинични прояви, като хепатит А с разпространението на леки, регистрация сериозна заплаха за смърт при бременна жени през втората половина на бременността, най-малко - в началото на раждането период, а при кърмачки (продължат с интензивна хемолиза, хемоглобинурия, остра бъбречна недостатъчност Стю и синдром на тежка тромб). Потвърдете диагнозата за откриване на антитела в кръвта.

    Хепатит В. Вирусен хепатит лекари предполагаеми ако болен 45-180 дни преди началото на кръвта на болестта прелята или неговите компоненти (еритроцити, левкоцити, тромбоцити маса) се провежда операцията, изследвания на вътрешния, множествена инжектиране (включително лекарства) или което се случва много по-често, ако пациентът е имал сексуална или близък контакт с пациенти с хепатит В. Критерии рано потвърждение на диагнозата е за откриване кръв HBs, НВе и HBc антигени и вирусната ДНК.

    Серологични маркери за остър хепатит В

    Хепатит С. За разлика от хепатит В, при диагностицирането на които се вземат под внимание антигенните и антителни маркери при хепатит С, ELISA открива само антитела, което се свързва с ниска концентрация на вируса в кръвта. Антигените на вируса на хепатит С могат да бъдат открити в проби от чернодробна биопсия.

    Лабораторната диагностика включва три основни типа тестове.

    Серологични маркери за остър хепатит С

    Определяне на антитела. Независимо от високата специфичност, модерните диагностични имуно-ензимни системи не са имунизирани от свръхдиагностика, т.е. положително положителни резултати. За да бъдат изключени, оценката се изисква и въз основа на резултатите от анализите, получени в различни интервали от време. Фалшиво-отрицателни резултати също са възможни, когато антивирусните антитела не могат да бъдат открити въпреки наличието на вируса в тялото. Това се случва в следните случаи:

    - началния период на заболяването;

    - по време на приема на пациенти с имуносупресори - лекарства, които потискат имунната система;

    - когато са заразени с определени генотипове (особено 3 и 4).

    Понастоящем се разработват търговски тестови системи за откриване на антитела срещу вируса на хепатит С от първия генотип. Обаче такива тестове може да не са достатъчно ефективни за надеждно откриване на антитела, когато се зарази вирус с различен генотип. Това е от голямо значение за регионите, където преобладават други видове вируси. По този начин, за ефективна диагностика на хепатит С, е необходим високо чувствителен тест, който е в състояние да реагира с антитела срещу вируса на хепатит С от всеки генотип.

    Определяне на вирусна РНК. За диагностични цели се извършва откриване на хепатит С вирус РНК Към днешна дата, този тест се счита за "златен стандарт" за диагностициране на хепатит С. За тази цел, най-широко използваните класически вариант полимеразна верижна реакция (PCR). С възможност да се следи възпроизводството на вируса, а също и да се прецени наличието в черния дроб и други тъкани. Определяне на РНК най-често се използва за потвърждаване на резултатите от откриване на антитела, представляват ранна диагноза на остър хепатит (вирусна РНК може да се открие вече в 7-21 дни след заразяването, че е много преди първото антитяло), за наблюдение на бременна перинатална инфекция и мониторинг на ефективността на антивирусната терапия.

    Данните от тези два анализа се допълват добре. Положителните резултати от анализа на PCR в комбинация с отрицателните резултати върху антивирусните антитела са характерни за някои периоди на остър хепатит. Негативните PCR анализи на фона на положителните тестове на антитела може да се дължат на ниска концентрация на вируса в кръвта, която не се улавя в PCR. Повтарящите се положителни PCR кръвни тестове отразяват активирането на вируса в клетките на черния дроб или други органи.

    PCR също се използва за откриване на вируса в чернодробната тъкан, взета от биопсия. Това дава по-пълна информация за развитието на инфекциозния процес, тъй като вирусът може да остане в хепатоцитите дълго време без да влиза в кръвта или да се намира в него в ниски концентрации. Това често се случва в ранните стадии на инфекция, но се наблюдава и при хроничен хепатит.

    Определяне на протеините (антигени) на вируса на хепатит С теоретичната възможност за откриване на хепатит С вирус протеини е създадена скоро след откриването на вируса при изследването имунофлуоресцентни тъкани, взети от черния дроб на пациенти с хроничен хепатит С хора и шимпанзета, заразени с вируса.

    Определянето на вирусни протеини (антигени) в кръвния серум поради ниското им съдържание не е било възможно за дълго време. Само наскоро бяха разработени методически подходи за откриване на имунен ензим на вътрешен C-протеин в кръвта и беше организирано производството на първите търговски тестови системи. Въвеждането им на практика ще позволи разрешаването на противоречиви диагностични въпроси на по-икономична основа, отколкото определянето на вирусната РНК. Определянето на нивата на ALT е най-евтиният метод за оценка на активността на потока от хепатит С. Въпреки това веднъж получените данни може да не са достатъчни за определяне на тежестта на заболяването.

    По-важна информация за увреждането на черния дроб може да бъде получена чрез определяне на концентрацията на ALT в продължение на няколко месеца. За да получите информация за степента на увреждане на черния дроб, недостъпна за други методи на изследване, може да се даде на лекаря чернодробна биопсия. Данните, получени в резултат на тази процедура, позволяват да се вземе решение за започване или отмяна на антивирусно лечение.

    Статията използва материали от отворени източници: Автор: С. Трофимов - Книга: "Болести на черния дроб"


    Статии Хепатит